课题基金 / 基金详情

振幅変動型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質の相互作用の解明

振幅変動型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質の相互作用の解明
使用可变振幅晶体振荡器阐明复杂的蛋白质相互作用
批准号：
14658184
负责人：
岡畑 恵雄
金额：
$2.11万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2002 至 2003
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658184/
关键词：
水晶発振子振幅の変化分子認識ユビキチン結合と解離DNAポリメラーゼDNA固定化発振子4穴式水晶発振子酵素反応機構

项目摘要

项目成果

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本研究では、水晶発振子の新しい使用法として、発振させる電圧を変化させることにより振幅を変化させ、結合している物質の解離と結合を制御できることを利用して、細胞内の複雑系タンパク質の相互作用の解析と構築と制御を行うことを目的に研究を行ない、以下の成果を得た。1)発振子上にDNAを固定化してDNAポリメラーゼ複合体を結合させた後で、水晶発振子に印加する電圧を変化させたときの振幅の研究から、DNA鎖は一本鎖の時より二本鎖になることによって剛直化することがわかった。2)発振子基板上にユビキチンを固定化し、ユビキチン分解酵素であるE1を添加するとユビキチンに酵素が結合し、蛋白の構造変化に由来する振動数変化が観察された。3)発振子基板上に多糖であるアミロペクチンを固定化し、アミロペクチン分解酵素であるグルコアミラーゼを添加すると、酵素の基質への結合過程による重量増加(振動数の減少)と、酵素が基質を加水分解することによる重量減少(振動数の増加)が連続的に観察できた。これにより酵素反応を発振子上で連続的に追跡できることがわかった。また発振子の振幅を変化させることにより糖鎖の柔らかさや酵素が結合したときの柔らかさの変化が追跡できることもわかった。4)振幅変動型の水晶発振子を用いれば、結合エネルギーを制御できるので複雑に相互作用しているタンパク質を順序よく解離・構築できることがわかり、今後のDNA-タンパク質や酵素間相互作用の研究に応用できることが明らかになり、有用な技術となる。
期刊论文(20)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
H.Furusawa, Y.Kitamura, N.Hagiwara, T.Turimoto, Y.Okahata: "Binding Kinetics of the Toroidal-Shaped PCNA to DNA Strands on a 27 MHz Quartz-Crystal Microbalance"ChemPhysChem.. No.5. 446-448 (2002)
H.Furusawa、Y.Kitamura、N.Hagiwara、T.Turimoto、Y.Okahata：“27 MHz 石英晶体微天平上环形 PCNA 与 DNA 链的结合动力学”ChemPhysChem.. No.5。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
岡畑 恵雄: "DNAフィルム"化学装置. 4月号. 60-62 (2003)
冈畑庆男：《DNA 胶片》化学设备 60-62（2003 年）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Y.Inoue, T.Fukusihima, T.Hayakawa, H.Takeuchi, H.Kaminishi, K.Miyazaki, Y.Okahata: "Antibacterial characteristics of newly developed amphiphilic lipids and DNA-lipid complexes against bacteria"J.Biomed.Mater.Res.. 65A. 203-208 (2003)
Y.Inoue、T.Fukusihima、T.Hayakawa、H.Takeuchi、H.Kaminishi、K.Miyazaki、Y.Okahata：“新开发的两亲性脂质和 DNA-脂质复合物对细菌的抗菌特性”J.Biomed.Mater。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H.Matsuno, Y.Okahata: "Direct Monitoring of DNA Cleavages catalyzed by an ATP-dependent Deoxyribonuclease on a 27 MHz Quartz-Crystal Microbalance"Chem.Commun. 470-471 (2002)
H.Matsuno、Y.Okahata：“在 27 MHz 石英晶体微天平上直接监测 ATP 依赖性脱氧核糖核酸酶催化的 DNA 裂解”Chem.Commun。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 10 条
    振幅可変型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質間相互作用の解明
    • 批准号：
      16655066
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.11万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    一分子ポリマーサイエンス
    • 批准号：
      13895022
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.05万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    超臨界流体中での脂質修飾酵素を用いる酵素触媒反応
    • 批准号：
      13875180
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.41万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    水晶発振子を用いる分子シンクロナイゼーションの定量的評価
    • 批准号：
      13022223
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $2.69万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology