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水晶発振子を用いる分子シンクロナイゼーションの定量的評価

水晶発振子を用いる分子シンクロナイゼーションの定量的評価
使用晶体振荡器定量评估分子同步
批准号：
13022223
负责人：
岡畑 恵雄
金额：
$2.69万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2001 至 2002
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13022223/
关键词：
DNAポリメラーゼ水晶発振子DNA固定化発振子4穴式水晶発振子酸素反応機構DNA鎖の伸長ポリメラーゼミカエリス-メンテン式

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项目成果

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水晶発振子マイクロバランス法を用いて生体中でおこる微細な各反応を質量変化としてとらえ、シンクロナイズされた全反応を定量的に評価することを目的として以下の研究成果をあげた。1)27MHz水晶発振子の金電極表面にビオチン-アビジン法を用いてプライマー/テンプレート部をもつDNA鎖を固定化し、水溶液中にポリメラーゼ(大腸菌由来のklenow fragment)とモノマー(dGTP or dATP)を加え、DNAのポリメラーゼ反応を振動数(重量)変化として追跡する事に成功した。2)各素過程はシンクロナイズされて進行するので、酵素のDNA鎖への結合過程(Ka/M-1),テンプレート鎖に沿った重合過程(km.kcat)および重合したDNA鎖からの脱離過程(Kd/M-1)の動力学定数を求めることができた。3)プライマーやテンプレート部分のDNAの塩基配列を変えたときの酵素の結合速度や重合速度、あるいは酵素の脱離速度について検討し、酵素重合速度がテンプレート鎖長に依存することがわかった。4)酵素がテンプレート部分をすべりながら重合していく過程を詳しく検討し、ポリメラーゼが最初にテンプレートに結合し、DNA鎖上を滑りながら重合していくことが明らかにできた。
期刊论文(16)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
H.Furusawa, Y.Kitamura, N.Hagiwara, T.Turimoto, Y.Okahata: "Binding Kinetics of the Toroidal-Shaped PCNA to DNA Strands on a 27 MHz Quartz-Crystal Microbalance"ChemPhysChem.. No.5. 446-448 (2002)
H.Furusawa、Y.Kitamura、N.Hagiwara、T.Turimoto、Y.Okahata：“27 MHz 石英晶体微天平上环形 PCNA 与 DNA 链的结合动力学”ChemPhysChem.. No.5。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
M.Naito, Y.Sasaki, T.Dewa, Y.Aoyama, Y.Okahata: "Effect of Solvation on Induce-fit Molecular Recognition in Supercritical Fluid to Organic Crystals immobilized on a Quartz Crystal microbalance"J. Am. Chem. Soc.. 123. 11037-11041 (2001)
M.Naito，Y.Sasaki，T.Dewa，Y.Aoyama，Y.Okahata：“溶剂化对超临界流体中对固定在石英晶体微天平上的有机晶体的诱导拟合分子识别的影响”J。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H.Matsuno, Y.Okahata: "Direct Monitoring of DNA Cleavages catalyzed by an ATP-dependent Deoxyribonuclease on a 27 MHz Quartz-Crystal Microbalance"Chem.Commun. 470-471 (2002)
H.Matsuno、Y.Okahata：“在 27 MHz 石英晶体微天平上直接监测 ATP 依赖性脱氧核糖核酸酶催化的 DNA 裂解”Chem.Commun。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H.Matsuno, K.Niikura, Y.Okahata: "Direct Monitoring and Kinetic Studies of DNA Polymerase Reactions on a DNA-immobilized Quartz-Crystal Microbalance"Chem. Eur. J.. 7. 3305-3312 (2001)
H.Matsuno、K.Niikura、Y.Okahata：“DNA 固定石英晶体微天平上 DNA 聚合酶反应的直接监测和动力学研究”Chem。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 8 条
    振幅可変型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質間相互作用の解明
    • 批准号：
      16655066
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.11万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    振幅変動型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質の相互作用の解明
    • 批准号：
      14658184
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.11万
    • 财政年份：
      2002
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    一分子ポリマーサイエンス
    • 批准号：
      13895022
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.05万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    超臨界流体中での脂質修飾酵素を用いる酵素触媒反応
    • 批准号：
      13875180
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.41万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      岡畑 恵雄
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    海外基金