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超臨界流体中での脂質修飾酵素を用いる酵素触媒反応

在超临界流体中使用脂质修饰酶的酶催化反应

基本信息

批准号：
12878104
负责人：
岡畑恵雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878104/
关键词：
脂質修飾酵素超臨界流体糖転移反応炭酸固定反応

项目摘要

本研究は、脂質修飾糖加水分解酵素を用いて二酸化炭素超臨界流体中での位置選択的な糖転移反応を行うことを目的として行い、以下の成果を得た。β-D-ガラクトシダーゼの水溶液とカチオン性脂質の水溶液を混合することにより、沈殿として脂質修飾酵素を得た。凍結乾燥したのち、タンパク含量や酵素活性を吸収スペクトルや活性部位滴定法で定量した。炭酸ガス圧縮ポンプと耐圧容器を用いて31℃、73気圧以上で超臨界状態にしたのち、耐圧ガラス容器に脂質修飾β-D-ガラクトシダーゼ、糖供与体であるラクトース、受容体であるオクタノールを加えて反応を行い、ガラス製の耐圧容器で反応が均一系で進行することを確かめた。所定時間後、減圧にして炭酸ガスとして反応媒体を気化した後、生成物の分析を液体クロマトグラフィーで行った。圧力と温度を変えることにより超臨界流体の密度と極性が自由に制御できるので、種々の反応条件下で酵素反応速度を検討した。またイソオクタンなどの有機溶媒中との反応速度や収率とも比較した。受容体としてのアルコール分子(R-OH)を変えて有用配糖化合物を合成した。リパーゼによるエステル合成反応、さらには二酸化炭素自体を基質として、ピルビン酸カルボキシラーゼにより二酸化炭素を有機物に転換するいわゆる"炭酸固定"反応についても検討した。

In this study, we used lipid modified sugar hydrolysis enzyme to acidify carbon supercritical fluid.β-D-1, 2-D-2, 3-D-3, 4, 5, 6-D-4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, Freeze-drying method for quantitative determination of enzyme activity by absorption and active site titration Carbon acid pressure reduction and pressure resistant vessels are used at temperatures above 31 ° C and 73 ° C in supercritical conditions. Pressure resistant vessels are used in lipid modification β-D-4 - 5 - 6- After a certain period of time, the pressure is reduced, the reaction medium is reduced, and the product is analyzed. Pressure, temperature, density, polarity, free control, enzyme reaction speed The reaction rate in organic solvents was compared. The receptor and the molecule (R-OH) are synthesized with glycosidic compounds. In the case of carbon acid fixation, the reaction is carried out in the presence of carbon dioxide as an organic substance.