振幅可変型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質間相互作用の解明

使用可变振幅晶体振荡器阐明复杂的蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

  • 批准号:
    16655066
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.11万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 2005
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

申請者らはこれまでに、水晶発振子の振動数がその電極上に結合する質量に比例して減少する(-1Hz=0.62ng cm-2)ことを利用して、様々な生体分子間相互作用の定量的解析を行ってきた。これまでは、水晶発振子の電圧を一定にして物質の結合による振動数の減少を見てきたが、本研究では、発振させる電圧を変化させることにより振幅を変化させ、結合している物質の解離と結合を制御できることを利用して、細胞内の複雑系タンパク質の相互作用の解析を定量的に行うことを目的にして研究を行い、以下の成果を得た。DNAポリメラーゼはテンプレート鎖に沿ってDNAを伸長する酵素であるが、ポリメラーゼはDNA鎖に横から挟み込むように結合しているだけであるので、それ単独ではDNA鎖を長く伸長できない。生体ではクランプとクランプローダーといわれるタンパク質と複合体を作ることによりポリメラーゼをはずれにくくし、長いDNA鎖を伸長できるようにしていると考えられている。水晶発振子の表面にDNA鎖とポリメラーゼ複合体を固定化し、振動電圧を3Vから5Vに増加させることにより振幅を大きくした。このことにより、弱く相互作用していたクランプやクランプローダーがDNA鎖から離れ、振幅を下げると可逆的に再結合する現象が水晶発振子の振動数変化から観察できた。このことからDNAポリメラーゼ複合体の結合の強さを定量化する事ができ、タンパク質複合体の再構築の制御が水晶発振子の振幅からできることがわかった。
Applicants ら は こ れ ま で に, crystal 発 oscillator の vibration number が そ の electrode に combining す る quality に proportion し て reduce す る (1 hz = 0.62 ng cm - 2) こ と を using し て, others 々 な raw body intermolecular interactions の quantitative analytical line を っ て き た. こ れ ま で は, crystal 発 oscillator の electric 圧 を certain に し て material の に よ る vibration reduced の を see て き た が, this study で は, vibration 発 さ せ る electric 圧 を variations change さ せ る こ と に よ を り amplitude variations change さ せ, combined し て い る material と の dissociation を suppression で き る こ と を using し て, intracellular の after 雑 タ ン パ ク qualitative の interaction の solution Line of photoacoustic を quantitative に う こ と を purpose に し を い, the following の て research を た. DNA ポ リ メ ラ ー ゼ は テ ン プ レ ー ト lock に along っ て DNA を elongation す る enzyme で あ る が, ポ リ メ ラ ー ゼ は DNA lock に transverse か ら carry み 込 む よ う に combining し て い る だ け で あ る の で, そ れ 単 alone で は DNA lock を long く elongation で き な い. Born body で は ク ラ ン プ と ク ラ ン プ ロ ー ダ ー と い わ れ る タ ン パ ク qualitative と complex を as る こ と に よ り ポ リ メ ラ ー ゼ を は ず れ に く く し を elongation, long い DNA lock で き る よ う に し て い る と exam え ら れ て い る. 発 crystal oscillator の surface に DNA lock と ポ リ メ ラ ー ゼ complex を immobilized し, vibration electrical 圧 を 3 v か ら に raised 5 v plus さ せ る こ と に よ り large amplitude を き く し た. こ の こ と に よ り interaction, weak く し て い た ク ラ ン プ や ク ラ ン プ ロ ー ダ ー が DNA lock か ら れ, amplitude under を げ る と reversible に combining す る phenomenon が 発 crystal oscillator の vibration number variations change か ら 観 examine で き た. こ の こ と か ら DNA ポ リ メ ラ ー ゼ complex の combined with strong の さ を quantitative す る matter が で き, タ ン パ ク qualitative complex の to construct の suppression が 発 crystal oscillator amplitude の か ら で き る こ と が わ か っ た.

项目成果

期刊论文数量(14)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kinetic Studies of DNA Cleavage Reactions catalyzed by an ATP-dependent Deoxyribonuclease on a 27-MHz Quartz-Crystal Microbalance
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    H.Matsuno;H.Furusawa;Y.Okahata
  • 通讯作者:
    Y.Okahata
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    R.Takei;S.J.Seo;C.S.Cho;Y.Okahata;T.Akaike
  • 通讯作者:
    T.Akaike
Kinetic Study of Phosphorylation-dependent Complex Formation between the Kinase-Inducible Domain (KID) of CREB and the KIX Domain of
CREB ​​激酶诱导结构域 (KID) 与 KIX 结构域之间磷酸化依赖性复合物形成的动力学研究
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    H.Matsuno;H.Furusawa;Y.Okahata
  • 通讯作者:
    Y.Okahata
Kinetic Studies of Site-Direct Mutational Isomalto-dextranase Catalyzed Hydrolytic Reactions on a 27 MHz Quartz-crystal Microbalance
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    T.Nihira;M.Mizuno;T.Tonozuka;Y.Sakano;T.Mori;Y.Okahata
  • 通讯作者:
    Y.Okahata
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    H.Nishino;A.Murakawa;T.Mori;Y.Okahata
  • 通讯作者:
    Y.Okahata
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