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振幅可変型水晶発振子を用いる複雑系タンパク質間相互作用の解明

使用可变振幅晶体振荡器阐明复杂的蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

批准号：
16655066
负责人：
岡畑恵雄
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らはこれまでに、水晶発振子の振動数がその電極上に結合する質量に比例して減少する(-1Hz=0.62ng cm-2)ことを利用して、様々な生体分子間相互作用の定量的解析を行ってきた。これまでは、水晶発振子の電圧を一定にして物質の結合による振動数の減少を見てきたが、本研究では、発振させる電圧を変化させることにより振幅を変化させ、結合している物質の解離と結合を制御できることを利用して、細胞内の複雑系タンパク質の相互作用の解析を定量的に行うことを目的にして研究を行い、以下の成果を得た。DNAポリメラーゼはテンプレート鎖に沿ってDNAを伸長する酵素であるが、ポリメラーゼはDNA鎖に横から挟み込むように結合しているだけであるので、それ単独ではDNA鎖を長く伸長できない。生体ではクランプとクランプローダーといわれるタンパク質と複合体を作ることによりポリメラーゼをはずれにくくし、長いDNA鎖を伸長できるようにしていると考えられている。水晶発振子の表面にDNA鎖とポリメラーゼ複合体を固定化し、振動電圧を3Vから5Vに増加させることにより振幅を大きくした。このことにより、弱く相互作用していたクランプやクランプローダーがDNA鎖から離れ、振幅を下げると可逆的に再結合する現象が水晶発振子の振動数変化から観察できた。このことからDNAポリメラーゼ複合体の結合の強さを定量化する事ができ、タンパク質複合体の再構築の制御が水晶発振子の振幅からできることがわかった。

The applicant applied for quantitative analysis of molecular interactions in living organisms by reducing the mass ratio of the number of vibrations of crystal oscillators bound to electrodes (-1Hz = 0.62ng cm-2). This study aims to study the quantitative analysis of the interaction between the complex system and the substance in the cell by changing the amplitude of the electric voltage of the crystal oscillator and controlling the dissociation and binding of the substance. The following results were achieved. DNA sequencing and sequencing are the key to DNA sequencing and sequencing. In vivo, the DNA lock is extended, and the DNA lock is extended. The crystal oscillator surface DNA lock is immobilized, the vibration voltage is increased from 3V to 5V, and the vibration amplitude is increased. The phenomenon of DNA lock separation, amplitude reduction, reversible recombination and vibration number change of crystal oscillator is observed. Quantification of the binding strength of the DNA complex and reconstruction of the crystal oscillator