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P2X受容体発現細胞を用いた脳組織細胞外ATP放出イメージング法の開発

使用 P2X 受体表达细胞开发脑组织细胞外 ATP 释放成像方法

基本信息

批准号：
15650071
负责人：
加藤総夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

脳組織におけるATPの細胞外放出をイメージングによって検証することが本研究の目的であった。昨年度、P2X_2受容体を発現させたHEK293T細胞がATP変化を検出し得るか検討したが、投与された外因性ATPに対する応答は長く持続的で、時間的な分解能が著しく低いこと、また、細胞間の発現効率の差のために十分な空間分解能が得られないことが判明した。以上より、細胞外代謝の速いATP濃度の変化を画像化するには、この方法は不適切であると結論した。そこで、本年度は新しい二つの試みを計画し実行した。第1は、超高感度光子検出カメラとluciferin-luciferase反応を用いて脳スライスにおける細胞外ATPを検出する試みである。海馬、大脳皮質、孤束核スライスにおいて電気刺激によるATP放出を画像化し得た。電気刺激による細胞外ATP濃度上昇は、(1)刺激電極の近傍に限局し、軸索終末近傍では観察されない、(2)テトロドトキシンによって消失しない、そして、(3)高K+濃度刺激によっては生じないことが明らかになった。これらは、脳スライスで電気刺激によってATPが放出されるとする現在までの報告の多くに重大な疑義を投げかける重要な結果である。第2は、バイオセンサーを用いた脳組織内局所的ATP濃度のリアルタイム計測である。同センサーは、2004年度までは開発国イギリス国内でしか使用できないという特許規定があったこと、また、開発者がヴェンチャー企業を設立し輸入手続に時間がかかったことなどから、研究代表者のもとに同センサーが届いたのは2005年1月であった。現在、同センサーを用いた脳スライスにおける細胞外ATP計測の実験を進行中である。以上より、本萌芽研究の目的は、当初の実験手法を変更したが、新たな方法を漸次採用することによって果たされ、萌芽段階ではない研究に進展しつつある。

The purpose of this study is to express the objective of this study. The tissue is responsible for the extracellular release of ATP. Last year, the P2X_2 acceptor showed that the temperature difference between HEK293T and ATP, the exogenous ATP response, and the decomposition of time can affect the temperature of low temperature, temperature, and intercellular temperature, and the difference between temperature and temperature. The above, the extracellular generation, the speed of the ATP, the visualization of the image, and the method of imaging. In the current year, the new plan will be completed in two years. 1. Ultra-high sensitivity photons are out of the luciferin-luciferase, using the extracellular ATP to detect the output of the photons. The sea fish, the big fish skin, and the nucleus tractus solitarius were stimulated by electrical stimulation, and the picture picture was released from the ATP. The extracellular ATP was stimulated by electrical stimulation, (1) the stimulation was close to the local limit, the end of the cable was used to monitor the temperature, (2) the temperature was not detected, and (3) the high K + stimulus was used. Don't pay attention to the use of electricity to stimulate the general ATP. The current financial report is very important. The results show that there are important results for investment. In the second chapter, you must use the ATP of the local office of the organization to determine the accuracy of the calculation. In the same period of time, the domestic customers of the developing countries in 2004 and the countries of the whole country in 2004 have been authorized to provide information on the use of customer service in the domestic market. At present, the extracellular ATP program is in progress in the same period of time. The above, the purpose of this sprout study, the method of the original method, the method of the new method, and the progress of the study in the bud stage.