脳内シナプス前神経伝達物質放出関連分子の遺伝子導入および発現阻害法の確立

脑内突触前神经递质释放相关分子基因导入及表达抑制方法的建立

基本信息

  • 批准号:
    17650116
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.18万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究の目的は、脳内シナプス前神経細胞への遺伝子導入およびタンパク質発現阻害の方法を確立することであった。この目的は達成され、極めて効率的なin vivo神経節遺伝子発現制御法を確立した。本法は以下の3段階からなる。1.頚部節状神経節への高効率核酸導入麻酔下に頚部節状神経節を露出し、神経節鞘内に核酸溶液を注入後、電気穿孔法によって細胞内に導入した。その結果、最適導入条件下、無視しうるほど僅かな細胞障害で約85%の細胞に核酸を導入することに成功した。2.節状神経節における導入遺伝子発現およびノックダウンの効果の評価核酸導入2-15日後に麻酔下に節状神経節を摘出した。EGFP遺伝子導入群においては、多くの細胞におけるEGFP発現を確認した。また、siRNA導入群においては、遺伝子ノックダウンの標的としてシナプス前で伝達物質放出を抑制するアデノシンA_1受容体の遺伝子を選び、導入の3-12日間持続するアデノシンA_1受容体mRNA量の有意な減少をreal-time RT-PCR法により確認した。この減少は対照のタンパクmRNAにおいては認められず、また、ランダム配列siRNAや溶液のみを導入した群においても認められなかった。3.延髄孤束核におけるシナプス前分子発現抑制効果の評価siRNA導入の11-15日後、孤束核2次ニューロンから記録された孤束1次求心線維刺激誘発シナプス後電流に及ぼすアデノシン(100μM)の効果が有意に減弱した。この減少は、ランダム配列siRNA・溶液導入群においては認められなかった。以上より、節状神経節における遺伝子発現ノックダウンによって、極めて効率的なシナプス前分子機能阻害が可能であることが証明され、その方法が確立された。本法の細部を記した論文を現在投稿準備中であり、公表後は脳科学の進展に大いに貢献すると期待される。
The purpose of this study is to establish a method for the prevention of gene transfer and protein expression in human brain cells. This goal is to achieve the highest efficiency in vivo and establish the control method for the development of neural tissue. This law is followed by three stages. 1. High-efficiency nucleic acid introduction into the brain node after exposure of the brain node, injection of nucleic acid solution into the brain node sheath, and intracellular introduction by electroporation As a result, about 85% of the cells were successfully introduced under optimal conditions, regardless of cell damage. 2. Nodular neurons were extracted 2-15 days after the introduction of DNA. EGFP gene expression was confirmed in many cells. In addition, siRNA was introduced into the target group and the target gene was detected by real-time RT-PCR. The target gene was detected by real-time RT-PCR. This reduces the number of siRNA molecules that can be introduced into the system. 3. After 11-15 days of siRNA introduction, the effects of current and protein (100μM) induced by the first time cardiac stimulation in the isolated nucleus were intentionally reduced. This is the first time that we have been able to reduce the number of siRNAs in our population. The method of molecular function inhibition of the above mentioned node and node is established. The details of this paper are now in preparation for submission, and after publication, they are expected to contribute greatly to scientific progress.

项目成果

期刊论文数量(9)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Functional analysis of brain synaptic transmission after in vivo gene silencing of presynaptic protein in the rat primary afferent ganglion
大鼠初级传入神经节突触前蛋白体内基因沉默后脑突触传递的功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Suzuki T;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Suppression of presynaptic inhibition by adenosine in the central synapses by RNA interference in the rat primary afferent ganglion in vivo
RNA干扰体内大鼠初级传入神经节中央突触腺苷对突触前抑制的抑制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Suzuki T;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Expression of exogenous protein in the primary afferent neurons for the visceral sensation by in-vivo gene transfer
通过体内基因转移在初级传入神经元中表达外源蛋白以产生内脏感觉
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shigetomi E;Yamada C;Nato F
  • 通讯作者:
    Nato F
In-vivo gene transfer of exogenous protein to the primary afferent neurons
外源蛋白体内基因转移至初级传入神经元
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Calcium channel blocker-insensitive component in the glutamate release in the autonomic sensory synapse in the mice is not attributable to blocker-insensitive N-type variants
小鼠自主感觉突触谷氨酸释放中的钙通道阻滞剂不敏感成分不能归因于阻滞剂不敏感的 N 型变体
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shigetomi E;Yamazaki K;Nishida M;Mori Y;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
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    加藤 総夫
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