脳内シナプス前神経伝達物質放出関連分子の遺伝子導入および発現阻害法の確立

脑内突触前神经递质释放相关分子基因导入及表达抑制方法的建立

基本信息

  • 批准号:
    17650116
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.18万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究の目的は、脳内シナプス前神経細胞への遺伝子導入およびタンパク質発現阻害の方法を確立することであった。この目的は達成され、極めて効率的なin vivo神経節遺伝子発現制御法を確立した。本法は以下の3段階からなる。1.頚部節状神経節への高効率核酸導入麻酔下に頚部節状神経節を露出し、神経節鞘内に核酸溶液を注入後、電気穿孔法によって細胞内に導入した。その結果、最適導入条件下、無視しうるほど僅かな細胞障害で約85%の細胞に核酸を導入することに成功した。2.節状神経節における導入遺伝子発現およびノックダウンの効果の評価核酸導入2-15日後に麻酔下に節状神経節を摘出した。EGFP遺伝子導入群においては、多くの細胞におけるEGFP発現を確認した。また、siRNA導入群においては、遺伝子ノックダウンの標的としてシナプス前で伝達物質放出を抑制するアデノシンA_1受容体の遺伝子を選び、導入の3-12日間持続するアデノシンA_1受容体mRNA量の有意な減少をreal-time RT-PCR法により確認した。この減少は対照のタンパクmRNAにおいては認められず、また、ランダム配列siRNAや溶液のみを導入した群においても認められなかった。3.延髄孤束核におけるシナプス前分子発現抑制効果の評価siRNA導入の11-15日後、孤束核2次ニューロンから記録された孤束1次求心線維刺激誘発シナプス後電流に及ぼすアデノシン(100μM)の効果が有意に減弱した。この減少は、ランダム配列siRNA・溶液導入群においては認められなかった。以上より、節状神経節における遺伝子発現ノックダウンによって、極めて効率的なシナプス前分子機能阻害が可能であることが証明され、その方法が確立された。本法の細部を記した論文を現在投稿準備中であり、公表後は脳科学の進展に大いに貢献すると期待される。
Purpose の this study は, 脳 シ ナ プ ス before god 経 cells へ の heritage 伝 son import お よ び タ ン パ ク qualitative 発 resistance against の way now を establish す る こ と で あ っ た. The objective of <s:1> is to achieve され, and the highly effective なin vivo Shinto festival remains 伝 result in the occurrence of the control law を is established た た. This law is divided into three stages below らなる らなる. Section 1. 頚 department section shape god 経 へ の under high working rate of nucleic acid import hemp 酔 に 頚 department section shape section 経 し を uncovered, and god 経 section intrathecal に を nucleic acid solution after injection, electric 気 perforation に よ っ て in cells に import し た. そ の results, under the condition of the optimum import, ignoring し う る ほ ど only か な cell barrier against で about 85% の に nucleic acid を import す る こ と に successful し た. Section 2. Section shape god 経 に お け る import legacy 伝 son 発 now お よ び ノ ッ ク ダ ウ ン の unseen fruit の review 価 nucleic acid import 2-15 later に hemp 酔 に section under section shape god 経 を pick the し た. EGFP is introduced into the 伝 subpopulation にお て て, multiple く <s:1> cells におけるEGFP occurrence を confirmation た. ま た, siRNA import group に お い て は, but 伝 ノ ッ ク ダ ウ ン の mark と し て シ ナ プ ス before で 伝 of substances released を control す る ア デ ノ シ ン A_1 by let body の heritage 伝 を choose び, import の 3-12 day hold 続 す る ア デ ノ シ ン A_1 by let body mRNA を の intentionally な it can reduce the real - time RT-PCR によ た confirmation of た. こ の reduce は polices according to の タ ン パ ク mRNA に お い て は recognize め ら れ ず, ま た, ラ ン ダ ム match column siRNA や solution の み を import し た group に お い て も recognize め ら れ な か っ た. 3. Delay marrow solitary nucleus に お け る シ ナ プ former ス molecular 発 now inhibit unseen fruit の review 価 siRNA import の 11 to 15, in the future two solitary nucleus ニ ュ ー ロ ン か ら record さ れ た solitary heart line 1 o d stimulation induced 発 シ ナ プ ス after current に and ぼ す ア デ ノ シ ン (100 microns) の unseen fruit が intentionally weakened に し た. <s:1> <s:1> reduces the coordination of <s:1> and ラ ダム ダム with siRNA. The solution introduction group にお て て recognizes められな った った. Above よ り section, section shape god 経 に お け る posthumous son 伝 発 now ノ ッ ク ダ ウ ン に よ っ て, extremely め て sharper rate な シ ナ プ before ス resistance molecular function may harm が で あ る こ と が prove さ れ, そ の way が establish さ れ た. This law の detail を remember し た paper を now contribute to で あ り, male table after は 脳 science advances の に big い に contribution す る と expect さ れ る.

项目成果

期刊论文数量(9)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Functional analysis of brain synaptic transmission after in vivo gene silencing of presynaptic protein in the rat primary afferent ganglion
大鼠初级传入神经节突触前蛋白体内基因沉默后脑突触传递的功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Suzuki T;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Suppression of presynaptic inhibition by adenosine in the central synapses by RNA interference in the rat primary afferent ganglion in vivo
RNA干扰体内大鼠初级传入神经节中央突触腺苷对突触前抑制的抑制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Suzuki T;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Expression of exogenous protein in the primary afferent neurons for the visceral sensation by in-vivo gene transfer
通过体内基因转移在初级传入神经元中表达外源蛋白以产生内脏感觉
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shigetomi E;Yamada C;Nato F
  • 通讯作者:
    Nato F
In-vivo gene transfer of exogenous protein to the primary afferent neurons
外源蛋白体内基因转移至初级传入神经元
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamada C;Shigetomi E;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
Calcium channel blocker-insensitive component in the glutamate release in the autonomic sensory synapse in the mice is not attributable to blocker-insensitive N-type variants
小鼠自主感觉突触谷氨酸释放中的钙通道阻滞剂不敏感成分不能归因于阻滞剂不敏感的 N 型变体
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shigetomi E;Yamazaki K;Nishida M;Mori Y;Kato F
  • 通讯作者:
    Kato F
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加藤 総夫其他文献

アストロサイト放出ヌクレオチドによるダイナミックなシナプス伝達制御
星形胶质细胞释放的核苷酸对突触传递的动态控制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    加藤 総夫;長谷川 奈海;和光 未加;井村 泰子
  • 通讯作者:
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孤束核シナプス前P2X2/3受容体を介した細胞外ATP誘発グルタミン酸即時放出
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
    加藤 総夫
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产生“疼痛”的大脑机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    加藤 総夫;高橋 由香里;杉村 弥恵
  • 通讯作者:
    杉村 弥恵
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伤害性疼痛的背景和生物学意义
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    加藤 総夫
  • 通讯作者:
    加藤 総夫
マウス外側腕傍核ー扁桃体中心核痛み活性化ニューロン間シナプス伝達の痛み誘発増強
疼痛诱导小鼠外侧臂旁核和中央杏仁核疼痛激活神经元之间突触传递的增强
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    内山 瑳和子;奥田 崇雄;高橋由香里;津田 誠;加藤 総夫
  • 通讯作者:
    加藤 総夫

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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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痛覚変調性疼痛における痛み関連シナプス可塑性のグリア・ニューロン間エネルギー連関
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    2024
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    $ 2.18万
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Role of parabrachial-central amygdala system in inflammation-pain association
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    2007
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    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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    2006
  • 资助金额:
    $ 2.18万
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    17023042
  • 财政年份:
    2005
  • 资助金额:
    $ 2.18万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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  • 批准号:
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  • 财政年份:
    2003
  • 资助金额:
    $ 2.18万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
横隔神経高頻度同期波の定量的スペクトル解析に基づく呼吸中枢作用薬の薬効評価
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    62770156
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    1987
  • 资助金额:
    $ 2.18万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

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