权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

脳内シナプス前神経伝達物質放出関連分子の遺伝子導入および発現阻害法の確立

脑内突触前神经递质释放相关分子基因导入及表达抑制方法的建立

基本信息

批准号：
17650116
负责人：
加藤総夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、脳内シナプス前神経細胞への遺伝子導入およびタンパク質発現阻害の方法を確立することであった。この目的は達成され、極めて効率的なin vivo神経節遺伝子発現制御法を確立した。本法は以下の3段階からなる。1.頚部節状神経節への高効率核酸導入麻酔下に頚部節状神経節を露出し、神経節鞘内に核酸溶液を注入後、電気穿孔法によって細胞内に導入した。その結果、最適導入条件下、無視しうるほど僅かな細胞障害で約85%の細胞に核酸を導入することに成功した。2.節状神経節における導入遺伝子発現およびノックダウンの効果の評価核酸導入2-15日後に麻酔下に節状神経節を摘出した。EGFP遺伝子導入群においては、多くの細胞におけるEGFP発現を確認した。また、siRNA導入群においては、遺伝子ノックダウンの標的としてシナプス前で伝達物質放出を抑制するアデノシンA_1受容体の遺伝子を選び、導入の3-12日間持続するアデノシンA_1受容体mRNA量の有意な減少をreal-time RT-PCR法により確認した。この減少は対照のタンパクmRNAにおいては認められず、また、ランダム配列siRNAや溶液のみを導入した群においても認められなかった。3.延髄孤束核におけるシナプス前分子発現抑制効果の評価siRNA導入の11-15日後、孤束核2次ニューロンから記録された孤束1次求心線維刺激誘発シナプス後電流に及ぼすアデノシン(100μM)の効果が有意に減弱した。この減少は、ランダム配列siRNA・溶液導入群においては認められなかった。以上より、節状神経節における遺伝子発現ノックダウンによって、極めて効率的なシナプス前分子機能阻害が可能であることが証明され、その方法が確立された。本法の細部を記した論文を現在投稿準備中であり、公表後は脳科学の進展に大いに貢献すると期待される。

Purpose の this study は, 脳シナプス before god 経 cells への heritage 伝 son import およびタンパク qualitative 発 resistance against の way now を establish することであった. The objective of <s:1> is to achieve され, and the highly effective なin vivo Shinto festival remains 伝 result in the occurrence of the control law を is established たた. This law is divided into three stages below らなるらなる. Section 1. 頚 department section shape god 経への under high working rate of nucleic acid import hemp 酔に頚 department section shape section 経しを uncovered, and god 経 section intrathecal にを nucleic acid solution after injection, electric 気 perforation によって in cells に import した. その results, under the condition of the optimum import, ignoring しうるほど only かな cell barrier against で about 85% のに nucleic acid を import することに successful した. Section 2. Section shape god 経における import legacy 伝 son 発 now およびノックダウンの unseen fruit の review 価 nucleic acid import 2-15 later に hemp 酔に section under section shape god 経を pick the した. EGFP is introduced into the 伝 subpopulation におてて, multiple く <s:1> cells におけるEGFP occurrence を confirmation た. また, siRNA import group においては, but 伝ノックダウンの mark としてシナプス before で伝 of substances released を control するアデノシン A_1 by let body の heritage 伝を choose び, import の 3-12 day hold 続するアデノシン A_1 by let body mRNA をの intentionally な it can reduce the real - time RT-PCR によた confirmation of た. この reduce は polices according to のタンパク mRNA においては recognize められず, また, ランダム match column siRNA や solution のみを import した group においても recognize められなかった. 3. Delay marrow solitary nucleus におけるシナプ former ス molecular 発 now inhibit unseen fruit の review 価 siRNA import の 11 to 15, in the future two solitary nucleus ニューロンから record された solitary heart line 1 o d stimulation induced 発シナプス after current に and ぼすアデノシン (100 microns) の unseen fruit が intentionally weakened にした. <s:1> <s:1> reduces the coordination of <s:1> and ラダムダム with siRNA. The solution introduction group におてて recognizes められなったった. Above より section, section shape god 経における posthumous son 伝発 now ノックダウンによって, extremely めて sharper rate なシナプ before ス resistance molecular function may harm がであることが prove され, その way が establish された. This law の detail を remember した paper を now contribute to であり, male table after は脳 science advances のに big いに contribution すると expect される.