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脳内シナプス前神経伝達物質放出関連分子の遺伝子導入および発現阻害法の確立

脑内突触前神经递质释放相关分子基因导入及表达抑制方法的建立

基本信息

批准号：
17650116
负责人：
加藤総夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、脳内シナプス前神経細胞への遺伝子導入およびタンパク質発現阻害の方法を確立することであった。この目的は達成され、極めて効率的なin vivo神経節遺伝子発現制御法を確立した。本法は以下の3段階からなる。1.頚部節状神経節への高効率核酸導入麻酔下に頚部節状神経節を露出し、神経節鞘内に核酸溶液を注入後、電気穿孔法によって細胞内に導入した。その結果、最適導入条件下、無視しうるほど僅かな細胞障害で約85%の細胞に核酸を導入することに成功した。2.節状神経節における導入遺伝子発現およびノックダウンの効果の評価核酸導入2-15日後に麻酔下に節状神経節を摘出した。EGFP遺伝子導入群においては、多くの細胞におけるEGFP発現を確認した。また、siRNA導入群においては、遺伝子ノックダウンの標的としてシナプス前で伝達物質放出を抑制するアデノシンA_1受容体の遺伝子を選び、導入の3-12日間持続するアデノシンA_1受容体mRNA量の有意な減少をreal-time RT-PCR法により確認した。この減少は対照のタンパクmRNAにおいては認められず、また、ランダム配列siRNAや溶液のみを導入した群においても認められなかった。3.延髄孤束核におけるシナプス前分子発現抑制効果の評価siRNA導入の11-15日後、孤束核2次ニューロンから記録された孤束1次求心線維刺激誘発シナプス後電流に及ぼすアデノシン(100μM)の効果が有意に減弱した。この減少は、ランダム配列siRNA・溶液導入群においては認められなかった。以上より、節状神経節における遺伝子発現ノックダウンによって、極めて効率的なシナプス前分子機能阻害が可能であることが証明され、その方法が確立された。本法の細部を記した論文を現在投稿準備中であり、公表後は脳科学の進展に大いに貢献すると期待される。

In this study, the purpose of this study is to determine the accuracy of the method for the purpose of this study. in this study, the purpose of this study is to ensure that there is a problem. The purpose of this article is to make sure that the imperial dharma is established by the establishment of the imperial dharma in order to achieve a high rate of success and success in in vivo. In the following paragraphs of this Act, the following three paragraphs are required to provide information. 1. The high-rate nucleic acid was injected into the brain under the anaesthesia and exposed. After the nucleic acid solution was injected into the sheath, the nucleic acid solution was injected into the cell by electroporation. The results showed that under the most favorable conditions, only about 85% of the nucleic acids were successfully transferred into the cells. two。 After 2-15 days, the nucleic acid was injected into the anaesthesia, and the nucleic acid was extracted. The EGFP administrator sub-boot into the group and the multi-user cell will confirm that the EGFP is correct. This is the first time that siRNA has been introduced into the group, and that the mRNA of A _ 1 acceptor has been released in the first place, and that in the third to 12th day, the real-time RT-PCR method has been used to confirm the tolerance of A _ 1 recipient. Please tell me that the siRNA solution is not available in the mRNA solution. 3. After 11-15 days of exposure to siRNA in the nucleus of the solitary tract, the nucleus of the solitary tract was implicated twice in the heart of the solitary tract in the first time, and the flow was detected in the nucleus of the solitary tract after stimulation. The siRNA solution will be added to the group in the first place. The above information system is used to determine the accuracy of the system, and the highly efficient pre-system molecular machine can prevent the system from being detected, and the method can be used to make sure that the system is correct. The Ministry of Science and Technology of this Law is now preparing for submission and is now in the process of making progress in science. I am looking forward to it.