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細胞内共生現象の分子生物学的・細胞生物学的研究

细胞内共生现象的分子和细胞生物学研究

基本信息

批准号：
61480018
负责人：
石川統
金额：
$ 3.52万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はアブラムシ細胞内共生系において共生体が唯一合成するタンパク質、シンビオニンの分離・精製に成功するとともに、その諸性質を明らかにし、多くの知見が得られたので、本研究全体の当初の目的をほぼ達成できたものと思う。以下にその概要を項目別に項目別に記す。1.硫安沈でんを出発とし、アブラムシ組織から種々のカラム操作を経て、シンビオニンを2次元電気泳動的に単一のスポットになるまで精製した。この結果、シンビオニンは63Kの単位12〜14個からなる分子量約800Kの巨大分子であることが明らかとなった。2.陰染色による電顕観察からは、シンビオニンは7個の単位からなるディスクが2層に重なった構造をもつことが示唆された。3.精製したシンビオニンをウサギに注射して得た抗血清によるイムノブロッティングからは、生体内にはシンビオニンの他に、多種類のその分離産物の存在することが示唆された。同分子が精製の過程で分解されやすいことも考え併せると、その生体内での役割が推測される。4.抗シンビオニン抗血清と交差反応を示すタンパク質はアブラムシ類だけでなく、原核細胞に広く分布することが明らかとなった。これらのタンパク質はSDS-PAGEによると何れも63Kの分子量を示す。5.2に述べたシンビオニンの電顕像は大腸菌groelタンパク質の像と酷似しており、そのアミノ酸組成ならびにN末端近傍のアミノ酸配列の比較もこの結果を支持した。また、精製したgroelタンパク質は抗シンビオニン抗血清と交差反応を示すことも明らかになった。以上の結果はシンビニオンがgroelタンパク質と相同であることを強く示唆する。6.抗シンビオニン抗血清を用いた免疫組織化学的技法によって、共生体を含むアブラムシ菌細胞が強く染め分けられることがわかった。

This year, we successfully synthesized and isolated the unique symbiont in the intracellular symbiont system, and we obtained a lot of knowledge about its properties. The original goal of this study was achieved. The following is a summary of each item. 1. The first step is to improve the quality of the products. As a result, the molecular weight of a giant molecule with a molecular weight of about 800 K is 12~14 units at 63 K. 2. The color of the film is different from the color of the film. 3. The presence of a variety of isolated products in vivo is indicated by the presence of antiserum, antiserum, and antiserum. The process of purification of the same molecule is expected to result in decomposition of the same molecule. 4. Anti-virus anti-serum anti-virus anti The molecular weight of 63 K was determined by SDS-PAGE. 5.2 The results of the comparison between the electron microscope images of E. coli groel and the electron microscope images of E. coli groel are supported by the comparison between the electron microscope images of E. coli groel and the electron microscope images of E. coli groel. The antiserum was purified and purified. The above results show that the quality of the product is the same as that of the product. 6. Anti-virus anti-serum used in immunohistochemical techniques, symbionts, and bacterial cells were strongly stained.