ショウジョウバエ初期胚における神経芽細胞の性特異的な形質発現の解析

早期果蝇胚胎神经母细胞性别特异性特征表达分析

• 批准号: 03804050
• 负责人: 仁木 雄三
• 金额: --
• 依托单位: Ibaraki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03804050/
• 关键词: ショウジョウバエ; 初期発生; 神経芽細胞; 性特異的致死因子; 神経構築; neurogenic mutant

本研究では、SROの初期発生への影響、特に神経細胞の形成や神経構築への影響を調べるための方法を開発し、神経形成異常突然変異胚への影響を詳細に解析した。胚を固定後、神経細胞を特異的に染色する抗HRP抗体で染色した後、0.001%トルイジンブル-で胚全体を薄く染色し、蛍光顕微鏡で抗HRP抗体で染色性の違いなどを確認した上で、胚発生全体への影響をノマルスキ-微分干渉顕微鏡等で調べた。また、通常の組織切片による観察において従来の固定法では、神経芽細胞と外胚葉性の細胞の区別が困難であるが、前固定をメタノ-ル法で行うと外胚葉性の細胞や神経芽細胞などが細胞質の染色性等により容易に識別できる。この方法により、SROの胚を調べると、神経芽細胞形成直後では、確かに細胞死は神経芽細胞のみに見られるが、その後外胚葉性の細胞も細胞死を起こしていく事が判明した。その後この様な胚では体節化が起らず、胚は正常なものに比べ胚全体が萎縮する事も分かった。神経形成に関しては、神経芽細胞が形成直後に細胞死を起こすにも関わらず、その後の発生において、神経細胞は完全にはなくならずに、しばらくは各体節ごとの規則性は保たれている事が判明した。しかし正常な胚と比べると染色性は大幅に減少していた。これは、SROの致死作用が必ずしも全ての神経芽細胞に及ばないのか、あるいは、死滅した神経芽細胞の代わりに外胚葉性の細胞が決定の変更を受けて2次的に神経細胞へと分化した可能性がある。この点に関しては今後の解析が必要である。外胚葉性細胞を神経細胞に変更させる事で知られるneurogenic mutantsに対するSROの影響に関しては、mastermind,neutralizedをヘテロに持つ系統にSROを感染させ、常に雄の出現が完全に抑えられる系統を作成し、その系統の生む卵の発生を調べた。neurogenic mutationをホモに持つ胚、ヘテロに持つ胚でそれぞれ雌雄があるが、抗HRP抗体で染色すると、それぞれの遺伝子型と性別が明瞭に区別され、しかも、ホモ接合体で雄の胚が最も大きな傷害を生じている事が分かった。また、胚全体が異常に萎縮し、神経細胞の大幅な減少と規則性が完全に失われてしまっていた。この事は、明らかにSRO特異的な致死作用を証明していると考えられる。

This study で は, (SRO) SRO の 発 born early へ の influence, に god の 経 cells forming や 経 build へ の influence を adjustable べ る た め の way を open 発 し, the formation of an anomalous 経 suddenly - god へ の effect を に detailed resolution し た. , god 経 cells after embryo を fixed を specific に dyeing す る で HRP antibody staining resistance し た, 0.001% after ト ル イ ジ ン ブ ル - で embryo を thin く dyeing し, 蛍 light 顕 micromirror で で HRP antibody staining resistance の violations い な ど を confirm し た で, embryo 発 bore all the へ の influence を ノ マ ル ス キ - differential dry involved 顕 micromirror で such as adjustable べ た. ま た, usually の biopsy に よ る 観 examine に お い て 従 fixed method to の で は, god 経 と bud cells from embryonic leaf sex の cell の が difficult で あ る が, former fixed を メ タ ノ line - ル method で う と leaf sex の embryonic cells や god 経 bud な ど が cytoplasm の dyeing such as に よ り に easily identify で き る. こ の way に よ り, (SRO) SRO の embryo を adjustable べ る と, god 経 bud cells formed straight after で は, indeed か に cell death は 経 bud god の み に see ら れ る が, そ の も leaf sex の embryonic cells die after を up こ し て い く matter が.at し た. After そ の こ の others な embryo で は somite change が up ら ず, normal embryo は な も の に than べ embryo all が atrophy す る matter も points か っ た. God 経 form に masato し て は, god 経 が bud cells forming straight after に cell death を こ す に も masato わ ら ず, そ の after の 発 raw に お い て, god 経 cell は completely に は な く な ら ず に, し ば ら く は the somite ご と の regularity は bartender た れ て い る matter が.at し た. <s:1> に <s:1> normal な embryos と are significantly に reduced compared with べると chromogenic た <s:1> て た た た. こ れ は, (SRO) SRO の lethal effect が will ず し も full て の god 経 に bud cells and ば な い の か, あ る い は, die out し た god 経 bud cells の generation わ り に leaf sex の embryonic cells が decided の - more を け て twice に god 経 cells へ と differentiation し た possibility が あ る. The に point に is related to the て て. In the future, the <s:1> analysis が is necessary である. Ectodermal cells を neurogenic cells に become させる and で know られるneurogenic Mutants に す seaborne る (SRO) SRO の influence に masato し て は, joint, neutralized を ヘ テ ロ に hold に つ system (SRO) SRO を infection さ せ, often appear に male の が completely に え suppression ら れ る system を し, consummate そ の system の む raw eggs の 発 raw を adjustable べ た. Neurogenic mutation を ホ モ に hold つ embryo, ヘ テ ロ に hold つ embryo で そ れ ぞ れ male and female が あ る が, resisting で HRP antibody staining す る と, そ れ ぞ れ の heritage 伝 sub-type と gender が clear に difference さ れ, し か も, ホ モ gametes で male の embryo が も most big き な damage を raw じ て い る matter が points か っ た. ま た, abnormal embryo all が に atrophy し, god 経 cells の な substantially reduce と regularity が entirely に lost わ れ て し ま っ て い た. The specific な lethal effect of <s:1> and ら に に of SRO is proved を by <s:1> て ると ると ると to えられる.