ニワトリ胚における第十因子異所性発現の生物学的意義

鸡胚胎中十因子异位表达的生物学意义

• 批准号: 03807011
• 负责人: 後藤 敏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03807011/
• 关键词: ウイルス活性化プロテア-ゼ; 血液凝固第十因子; ニワトリ胚; パラミクソウイルス; オルソミクソウイルス; 膜融合タンパク; ウイルストロピズム; プロトロンビン検

平成2年度までにニワトリ胚漿尿液中のウイルス活性化プロテア-ゼ(VAPI)は血液凝固第十因子(FX)であることを突き止めている。平成3年度においては次のことを明かにした。1、ニワトリ胚のもう一つのウイルス増殖場である羊水中のVAPIも蛋白精製により活性型FX(FXa)であることが判明した(FEBS Lett.in press)。2、漿尿膜、肝より作製したcDNAライブラリ-よりVAPI(FX)遺伝子のクロ-ニング、塩基配列を決定し、VAPIとFXが同一であることをさらに明確に証明した(FEBS Lett.283.281ー285,1991)。3、漿尿液より精製したVAPIを抗原として、兎より抗VAPI抗血清を得た。この抗血清と上記のVAPI特異cDNAを利用し、Western blotting、蛍光抗体法、Northern blottingにより、FXとそのmRNAの組織分布を明かにした。ニワトリ胚での発現組織は肝、漿尿膜、羊膜、腎、脾、腸管であり、hutching後も基本的にはその分布は変わらなかった。なお、活性型のFX(FXa)が存在する部位は漿尿液、羊水のみであり、ウイルスのトロピズムによく一致した(EMBO J.in press)。4、shellless embryonated eggの系を使って、soybean trypsin inhibitor、FXの特異的抑制物質であるダンシルGluーGlyーArgCH_2Clを羊水中に投与したが、ニワトリ胚への明確な影響は残念ながら観察できなかった。ニワトリでの第十因子の異所性発現が鶏胚においても又hutching後も基本的に変化しないことがわかったが、その生理的意義までは解明できなかった。この解明には、第十因子欠損マウス(ニワトリ)の作製などの新しい実験が必要とされる。

In 2002, the blood coagulation factor X (FX) was activated in the plasma and urine. Heisei 3 years ago 1. VAPI protein purification in amniotic fluid is identified by FXa (FEBS Lett.in press). 2. Uroplasma membrane and liver preparation: cDNA translation: VAPI(FX) gene translation: VAPI and FX are the same as each other, which is clearly proved (FEBS Lett.283.281 - 285,1991). 3. Purified urine and anti-VAPI antiserum The tissue distribution of VAPI-specific cDNA using antiserum, Western blotting, fluorescent antibody, Northern blotting and FX was investigated. The embryonic tissues are liver, plasma membrane, amniotic membrane, kidney, spleen and intestine. The active FX(FXa) is present in the urine and amniotic fluid (EMBO J.in press). 4. Shellless embryonated egg system, soybean trypsin inhibitor, FX specific inhibitor, Glu Arg-CH_2Cl, amniotic fluid, and clear effects. The tenth factor of heterosis appears in the embryo and hutting after the basic transformation, and the physiological significance of the tenth factor is explained. The tenth factor of this solution is insufficient.

项目成果

Suzuki,H.: "Primary structure of the virus activating protease from chik embryo;its identity with the blood clotting factor Xa" FEBS Lett.283. 281-285 (1991)

Suzuki,H.：“来自 chik 胚胎的病毒激活蛋白酶的一级结构；其与凝血因子 Xa 的同一性”FEBS Lett.283。

Nagai,Y.: "Behring Institute Mitteilungen No.89 Mechanisms of Pathogenicity in Infectious Diseases" Die Medizinisch Verlagsgesellschaft mbH, 11 (1991)

Nagai,Y.：“Behring Institute Mitteilungen No.89 传染病致病机制”Die Medizinisch Verlagsgesellschaft mbH，11 (1991)

Ogasawara,T.: "Expression of the factor X and its significance for the determination of paramyxovirus tropism in the chick embryo." EMBO J.11. (1992)

Ogasawara,T.：“X 因子的表达及其对于确定鸡胚中副粘病毒向性的意义。”

Gotoh,B.: "Isolation of factor Xa from chick embryo as the amniotic endoprotease responsible for paramyxovirus activation." FEBS Lett.(1992)

Gotoh,B.：“从鸡胚中分离出 Xa 因子，作为负责副粘病毒激活的羊膜内蛋白酶。”

後藤 敏: "免疫薬理 vol.9 no.2 特集:ウイルス感染とレセプタ-" ライフサイエンス出版, 7 (1991)

后藤聪：“免疫药理学第9卷第2期专刊：病毒感染和受体”生命科学出版社，7（1991）