ウニ孵化酵素の構造と特異性および作用機構

海胆孵化酶的结构、特异性和作用机制

• 批准号: 04640681
• 负责人: 野村 晃司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640681/
• 关键词: ウニ; 孵化酵素; 特異性; システインスウィッチ; インヒビター; マトリックスメタロプロテイナーゼ

バフンウニの孵化酵素はRed-agaroseとSuperose12HRを用いて電気泳動的にほぼ均一なものを調製できた.20匹の雌ウニから約100μgという比較的良好な収量ではあるが,構造レベルの研究には十分な量ではない. 酵素前駆体を単離する試みはうまく行かなかった.再度試みるつもりであるが,酵素前駆体の体外分泌と活性化の双方にCaが必須であるとすると,非常に困難であると思われる.精製した孵化酵素を27℃で18h放置すると分子量が37Kから32Kに減少し,これにともなって受精膜溶解活性が著しく減少するのに対し,カゼインやヒトα_1-プロテイナーゼインヒビター(α_1-PI)に対する非特異的な蛋白質分解活性はそのまま保持することを見いだした.減少した分子量5K分の断片はおそらくC末端側のドメインで,この部分が受精膜に対して高い親和性をもつために,孵化酵素が受精膜に特異的に結合してこれを溶解することができると考えられる.この断片を単離して早急に構造を決定する予定であるが,逆に,受精膜の方にも,これと特異的に結合する特定の蛋白質があると思われるので,それもアフィニティクロマトで単離し,阻害剤としての作用も検討したい.酵素前駆体のプロペプチド領域にはシステインを含む保存性の高い配列がある.このCysが活性中心のZnに配位して活性の発現を抑えている.この配列を持つペプチドAc-Pro-Arg-Cys-Gly-Val-Pro-Asp-Val-NH_2を合成した.このペプチドは可逆的ではあるが,ウニの孵化を阻害し,0.5mM以上で3-5h遅らせた.α_1-PIを基質としたとき,このペプチドとAla^6-置換体は孵化酵素をよく阻害するが,D-Cys^3-置換体は全く阻害せず,このシステインスウィッチペプチドの阻害作用が立体特異的であることが明らかになった

The enzyme incubation enzyme Red-agarose Superose12HR was incubated by electrophoretic electrophoresis. the average temperature of 20 females was about 100 μ g. The concentration of the enzyme was very good. The precursor of the enzyme is isolated from the body. If you try again, it is very difficult for the enzyme precursor to secrete active Ca in vitro, so it is very difficult to do so. The sperm incubation enzyme was placed at 27 ℃ for 18 h, the molecular weight was 37K, the molecular weight was 32K, the activity of fertilized membrane was reduced, the activity of fertilization membrane was reduced, the activity of sperm membrane was reduced, and the activity of protein degradation was not detected in the enzyme (α _ 1-PI). The molecular weight is 5K, the molecular weight is 5K. In order to determine the accuracy of the method, the combination of the specific protein, the sperm membrane, the sperm membrane and the sperm membrane were determined. The enzyme precursors are highly conserved in the field. The active center of Cys, the coordination site of Zn, the active site, the activity, the inhibitory activity, the antitumor activity, and the antitumor activity. The configuration of the column holds that the Ac-Pro-Arg-Cys-Gly-Val-Pro-Asp-Val-NH_2 is synthetic. The incubation rate is reversible, the incubation rate is 3-5h, the alpha _ 1-PI gene is located at 3h, the enzyme is incubated, the enzyme is blocked, and the whole body is blocked by DCys

项目成果

Kohji Nomura and Norio Suzuki: "Stereo-specific Inhibition of Sea Urchin Envelysin (Hatching Enzyme) by a Synthetic Autoinhibitor Peptide with Cysteine-Switch Consensus Sequence" FEBS Letters. (1993)

Kohji Nomura 和 Norio Suzuki：“具有半胱氨酸开关共识序列的合成自身抑制剂肽对海胆包膜素（孵化酶）的立体特异性抑制”FEBS Letters。

野村 晃司: "ウニの孵化酵素 その混迷の研究史とマトリックスメタロプロテイナーゼとしての新しい展開" 化学と生物. 30. 489-490 (1992)

Koji Nomura：“海胆孵化酶：其令人困惑的研究历史和作为基质金属蛋白酶的新发展”，化学与生物学，30. 489-490 (1992)。