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メダカ孵化酵素遺伝子発現と孵化腺細胞の分化

青鳉孵化酶基因表达与孵化腺细胞分化

基本信息

批准号：
07858084
负责人：
安増茂樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

○メダカ孵化酵素遺伝子の発現調節機構。メダカ胚で孵化腺細胞特異的に発現するレポーター遺伝子の作成を目標とした。翻訳開始点よりメダカ孵化酵素遺伝子の上流域数キロbpを含むDNA断片の3'側にβガラクトシダーゼの構造遺伝子部分を孵化酵素遺伝子のATGに読み枠が一致するように接続したベクターを作成した。遺伝子導入はメダカ胚の1細胞期を用い顕微注入法により行った。具体的には、ベクターpMC1871よりβガラクトシダーゼの構造遺伝子部分を切り出しpBluescriptに挿入し、さらにLCE遺伝子上流3kbpを含む断片を,またHCE遺伝子(Hcele)の上流1.8kbを含む断片を挿入した。出来上がったベクター中のレポーター遺伝子部分を制限酵素で切りだし、精製後、顕微注入法により遺伝子導入した。適当なステージまで発生させ固定後、酵素の発色により遺伝子発現を観察した。結果は、上記の2種のベクターでは、遺伝子の発現は見られなかった。なお、SV40のプロモーター、エンハンサーでは遺伝子発現が見られることより、インジェクション法に問題があるとは考えられず、挿入した遺伝子断片中に、孵化酵素遺伝子発現に必要十分なcis-調節領域が含まれていないことが予想される。現在、新たな遺伝子断片を含むレポーター遺伝子を作成中である。○孵化線細胞の分化のタイミングゼブラフィシュのク-スコイドcDNAを用いメダカ胚cDNAライブラリーをスクリーニングしてメダカグ-スコイドcDNAをクローン化した。whole mount in situハイブリダイゼーションの結果、グ-スコイド遺伝子は初期嚢胚期でオ-ガナイザー領域で発現が見られ、後期嚢胚期では主に体軸の前方で発現している。体節形成期において孵化酵素遺伝子とグ-スコイド遺伝子の発現を2重染色法により検出すると一致した細胞で発現が見られる。このことは、孵化線細胞の前駆細胞がオ-ガナイザー領域に存在することを示唆している。

○ Incubation enzyme gene expression regulatory mechanism. The purpose of the production of embryos is to develop specific embryos. The number of upstream bp of the incubation enzyme gene is determined by the sequence of DNA fragments on the 3'side and the sequence of ATG genes of the incubation enzyme gene. The gene was introduced into the embryo at the 1-cell stage by microinjection. Specifically, pMC1871 is a fragment of the structural gene part of the LCE gene, which contains a fragment of 3kbp upstream, and a fragment of 1.8 kb upstream of the HCE gene. In addition, the gene part of the enzyme is restricted, and the gene is introduced by microinjection after purification. After the enzyme is immobilized, the enzyme is detected. The results showed that there were two kinds of SV40 is the most important part of the process of enzyme development, and it is necessary to develop a cis-regulatory domain that contains the necessary information. Now, the new generation contains the new generation. Incubation of cell differentiation and differentiation of cDNA fragments using cDNA fragments. Whole mount in situ During the development of somite, the development of incubation enzyme gene and protein gene was detected by two-fold staining. The cells in front of the hatching line are present in the field.