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メダカ孵化酵素タンパク質の構造と機能

青鳉孵化酶蛋白的结构与功能

基本信息

批准号：
03640615
负责人：
山上健次郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03640615/
关键词：
メダカ孵化孵化酵素 HCE LCE プロテア-ゼプロ酵素卵膜分解

项目摘要

1.メダカ孵化酵素の成分プロテア-ゼ,HCEとLCE,に対するポリクロンにおよびモノクロン抗体を用して、免疫ブロット法により、発生過程における両酵素の生成と、単離分泌顆粒内における両酵素の在存状態をしらべた。HCE,LCEともに、受精後2〜3日目の胚で出現し、孵化直前まで増加し、孵化とともに消失する。発生中の胚には成熟酵素(HCEは24K、LECは25,5K)とともに、それぞれの抗体と反応する、それらより高分子量のタンパク質(34.5〜36.5Kおよび38K)が見出され,これらはプロ酵素であろうと思われる。単離分泌顆粒の免疫細胞化学的分析によって、同一顆粒にHCEとLCEが共に局在することがわかった。さらに、顆粒中央部にはHCEが、また顆粒周縁部にはLCEが分布することも明らかとなった。2:発生中の胚から得たmRNAを用いて作ったcDNAライブラリ-から、抗体を用いてHCEとLCEのCDNAクロ-ニングを行った。両者のORFはともに20アミノ酸からなるシグナルペプチドを含み、プロペプチド部はそれぞれ、59および50アミノ酸である。また、成熟した酵素部分はともに200アミノ酸である。これらの結果は(1)に記したプロ酵素の存在を支持するものである。HCE、LCEともに、プロペプチド部分に糖鎖がついている可能性が高い。3:HCEの卵膜に対する作用機構をしらべるために、HCE分子の断庁化を行った。分子量約10Kの断庁の中に、卵膜を結合する活性を有するものが得られている。今後、この断庁の構造を明らかにし、卵膜と結合する部位の構造を明らかにするとともに、卵膜膨潤作用の機構を解明して行く予定である。

1. The components of incubation enzymes are classified into two groups: HCE and LCE, and the production and existence of enzymes in the production and secretion of granules during the development process. HCE,LCE, embryo appear 2 ~ 3 days after fertilization, increase after hatching, disappear after hatching. During development, mature enzymes (HCE at 24K, LEC at 25,5K) are present in the embryo, and antibodies and enzymes with high molecular weight (34.5 ~ 36.5 K) are present in the embryo. Immunocytochemical analysis of secretory granules, HCE and LCE of the same granule The central part of the grain is HCE, and the peripheral part of the grain is LCE. 2: The development of embryonic DNA in the mRNA, antibody, cDNA, HCE, LCE, CDNA, CDNA. The ORF of the patient is 20 ° C, 59 ° C and 50 ° C. The mature enzyme is 200 degrees. The results of this study are as follows: HCE, LCE, etc. are highly probable. 3. The mechanism of action of HCE on egg membrane is discussed. Molecular weight of about 10K in the medium, egg membrane binding activity, there is no such thing as a mixture. In the future, the structure of the fracture, the structure of the joint of the egg membrane, and the mechanism of the swelling of the egg membrane will be explained and determined.