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メダカ孵化酵素,HCEとLCE,の腺細胞内出現とその局在性

青鳉孵化酶 HCE 和 LCE 在腺细胞中的出现和定位

基本信息

批准号：
02640567
负责人：
山上健次郎
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

メダカ孵化酵素は単一の酵素ではなく、2種のプロテア-ゼ、HCEとLCE、より成る1種の酵素系であることはすでに我々が報告してきた通りである。これらの成分酵素タンパク質のそれぞれに特異性を持つポリクロンおよびモノクロン抗体をすでに作製しており、これらを用いて、発生過程において孵化腺細胞内にこれらの酵素の合成される時期をしらべ、さらに腺細胞内におけるこれら両酵素の局在をしらべるのが本研究課題における目的であった。まず、両酵素の出現のタイムコ-スをしらべる為に、各発生段階の胚のホモジェネ-トをSDSーポリアクリルアシド電気泳動により分画し、さらにそれぞれに特異的な抗体を用いた免疫ブロツテイング法によりしらべた。その結果、HCEは2日目胚において、またLCEは3日目胚においてそれぞれ認められはじめ、両者共に孵化期まで顕著な量的増加を示すが孵化後の幼生には認められない。最初に検出できる発生段階がHCEとLCEで約1日分ずれているが、HCEに比べLCEの生成される絶対量がはるかに少ないことと、抗体による検出感度の差を考えると、両者の生成が同時に起っている可能性も充分にあり得る。なお、HCE、LCEのそれぞれと同一抗原性をもつ高分子量タンパク質が胚のホモジェネ-ト内に見出され、それぞれの前駆体と思われる。一方、両酵素の腺細胞内局在性をしらべた所、両者とも同一腺細胞で作られるばかりでなく、同一分泌顆粒に貯蔵されることがわかった。すなわち、それぞれのウサギのポリクロン抗体又はハツカネズミのモノクロン抗体を1次抗体とし、ロダミンおよびFITCでラベルした2次抗体を用いて二重染色をすると、同一分泌顆粒の内部にHCEが含まれ、それをとり囲んで周囲にLCEが含まれていることがわかった。これらの内容は公表準備中である。

The enzyme incubation enzyme contains one enzyme enzyme, two enzymes, HCELCE, and one enzyme. The enzyme is the enzyme enzyme. We report that there is no enzyme in the market. The ingredient enzymes, enzymes, In this study, the purpose of this study is to determine the level of enzymes in the cells of the glands. The enzyme and enzyme showed that there was no change in the temperature of the embryo, the embryo, the SDS, the electrophoretic electrophoresis, the antibody of the enzyme, and the immune response of the enzyme. The results of the experiment, the results of the HCE 2-day embryo, the 3-day embryo of the LCE, and the total amount of the baby during the incubation period showed that the baby was born after hatching. In the first place, the HCE LCE was detected in about 1 day, the HCE was more sensitive than the LCE, the sensitivity of the antibody was less than that of the antibody, and the possibility of simultaneous production of the antibody was fully successful. The antigenicity of the same antigenicity was similar to that of HCE, LCE, and the same antigenicity. On the one hand, the enzyme gland is located in the cell of the sex gland, and the same gland cell is used as the same gland cell, and the same secretory gland is secreted in the same cell. The first antibody, the second antibody, the second antibody, the third antibody, the second antibody, the same secretory granule, the internal HCE of the same secretory granule, the LCE of the same secretory granule, the LCE of the same secretory granule. In the preparation of the public table, the contents of the contents are not available.