权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

メダカ孵化酵素遺伝子の解析

青鳉孵化酶基因分析

基本信息

批准号：
04640672
负责人：
山上健次郎
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640672/
关键词：
メダカ孵化酵素 HCE LCE cDNA 遺伝子発現分化プロテアーゼ

项目摘要

本研究課題において目的とした以下の3つの点に関して述べる。(1)孵化酵素遺伝子の発現と腺細胞の分化:申請者らはメダカ孵化酵素の2成分、HCEとLCE、に特異的な抗体を用いて発生過程における酵素タンパク質の形成をしらべ、両成分ならびにそのプロ酵素のタンパク質が発生第2日目に検出できることを確かめた。これらは同一分泌顆粒中に含まれる。さらにHCEとLCEのcDNAのクローニングを行い、その断片をプローブとして発生過程における胚からのRNA抽出物のノザン分析を行った。その結果、遺伝子発現は発生第2日(レンズ形成初期)に起り第3日にかけて急激に活発化することが判明した。すなわち、遺伝子発現後たゞちに翻訳されることが判った。(2)HCE及びLCEの比較分子生物学的研究:両者のcDNAクローンの分析を行い、LCEとHCEはともに20アミノ酸のシグナルペプチドをもち、51および50のアミノ酸から成るプロペプチドを有し、ともに200アミノ酸の成熟ペプチドから成るプレプロ酵素として合成されることが判った。両成熟酵素のアミノ酸配列のホモロジーは55%である。両酵素ともにその活性中心と考えられる共通配列の構造は酷似しており、Znを配位するヒスチジンを含む5残基はコラゲナーゼなどの細胞間質分解金属プロティナーゼの共通配列と同一である。さらにこの5残基を含む12アミノ酸残基はアスタシン族と呼ばれるZn-プロテアーゼの活性中心の構造と同じである。なお、孵化腺細胞内にあるプロ酵素から分泌時に成熟型酵素に活性化されるが、この過程はEDTAにより粗害されるので、おそらく自己触媒的に起ると考えられる。(3)ゲノムDNAの構造解析:cDNA断片をプローブとしてHCE、LCEのゲノムDNAをクローン化した。LCEは7つのイントロンをもつ構造であるがHCEはイントロンがなく、複数の遺伝子が縦列している。

The purpose of this study is to discuss the following three points. (1)Development of Incubation Enzymes and Differentiation of Glandular Cells: Applicants should examine the development of two components of Incubation Enzymes, HCE and LCE, and specific antibodies. The same secretory granule contains. In addition, the cDNA fragments of HCE and LCE were analyzed during the development process. The results of the test and the results of the test were found on the 2nd day (the initial stage of the test) and on the 3rd day (the initial stage of test). After the discovery of the virus, the virus was detected. (2) Comparative molecular biology studies of HCE and LCE: cDNA analysis of HCE, LCE and HCE: 20-amino-2-methyl-p-nitro-p-nitro-p-nitro The mature enzyme is 55% higher than the mature enzyme. The structure of the common coordination of the active center of the enzyme is similar to that of the common coordination of the 5 residues of the enzyme. The structure of the active site is similar to that of the Zn-5 residue. In the incubation gland cells, the mature enzyme is activated during secretion, and the process EDTA is used to cause crude damage. (3)DNA analysis:cDNA fragments were extracted from HCE and LCE DNA fragments. LCE is the most important component of the structure, and HCE is the most important component.