酵母ペルオキシソームに見出された新しい分子シャペロン様蛋白質

在酵母过氧化物酶体中发现一种新的分子伴侣样蛋白

• 批准号: 04660121
• 负责人: 上領 達之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660121/
• 关键词: 非特異的脂質輸送蛋白質; 長鎖アシル-CoA酸化酵素; ペルオキシソーム; 酸素ストレス; 分子シャペロン

本研究の目的は、我々が炭化水素資化性酵母 Candida tropicalisに見出した非特異的脂質移送蛋白質(PXP‐18)がペルオキシソームで働く分子シャペロンである可能性を追求し、その生理的な役割を明らかにすることである。これは、ペルオキシソーム蛋白質の輸送機構を理解してこのオルガネラを有用な蛋白質の安定な生産系として利用しようとする究極的な目標への一過程である。従来は単離ペルオキシソームから調製していたPXP‐18を基質量で取り扱うために、凍結細胞の全破砕液から直接精製する方法を開発した。酵母のアシル‐CoA酸化酵素(ACo)をその活性が約10%にまで低下する条件下で酸(pH4.9)または熱(65℃)処理する際に適量のPXP‐18を共存させると、酸化酵素の失活が抑制され40〜70%の活性が保持された。この効果はPXP‐18に特異的であって、この蛋白質と物理化学的性質の類似したリゾチームや血液中で脂質を運搬するアルブミンでは代替されない。また濃度依存的でもあり、8量体で存在する酸化酵素のサブユニットあたりモル比で50〜100倍量のPXP‐18が存在し、且つ系全体のタンパク質濃度が高いこと(ACOサブユニットが0.5μM前後)を必要とする。類似の効果が尿酸酸化酵素に対しても観察されたので、PXP‐18の失活抑制効果は基質を介してではなく、酵素蛋白質に対して発揮されるものと推定される。実際、PXP‐18がACOと相互作用していることは、非変性条件下での電気泳動またはショ糖密度勾配遠心で分画されたACO画分をPXP‐18に対する抗体でウエスタン解析することによって示された。PXP‐18の遺伝子を破壊された酵母細胞は、ペルオキシソーム形成に必須なPAS1遺伝子の破壊株と同様、活性酸素増産剤であるプラムバギンに対する感受性が高まることが見出され、PXP‐18が酸や熱の他に酸素ストレスに対する保護機能をもつことが示唆された。

は の purpose, this study I 々 が coking water endowment nature yeast Candida tropicalis に shows し た nonspecific lipid transfer proteins (PXP ‐ 18) が ペ ル オ キ シ ソ ー ム で 働 く molecular シ ャ ペ ロ ン で あ る possibility を し, そ の physiological な "を cut Ming ら か に す る こ と で あ る. こ れ は, ペ ル オ キ シ ソ ー ム protein の transportation agency を understand し て こ の オ ル ガ ネ ラ を useful な protein の stability な production department と し て using し よ う と す る ultimate な target へ の process で あ る. 従 to は 単 from ペ ル オ キ シ ソ ー ム か ら modulation し て い た PXP ‐ 18 を base quality で take り Cha う た め に, frozen cells の 砕 breaking liquid か ら directly refined す る method を open 発 し た. Yeast の ア シ ル ‐ CoA acidification enzyme (ACo) を そ の active が about 10% に ま low で す で acid (pH4.9) ま る conditions た は heat (65 ℃) 処 Richard す る interstate に moderate の PXP ‐ 18 を coexistence さ せ る と, acidic enzyme deactivation が の suppression さ れ 40 ~ 70% の activity was が さ れ た. 18 に こ の unseen fruit は PXP ‐ specific で あ っ て, こ の protein と of physical and chemical properties similar し の た リ ゾ チ ー ム や で lipids in the blood を carrying す る ア ル ブ ミ ン で は instead of さ れ な い. ま た concentration dependent で も あ り, 8 quantity body exist で す る acidification enzyme の サ ブ ユ ニ ッ ト あ た り モ ル than で 50-100 times the amount of の PXP ‐ 18 が し and つ exist all の タ ン パ ク high mass concentration が い こ と (ACO サ ブ ユ ニ ッ ト が 0.5 microns) before and after を necessary と す る. Similar の unseen fruit が uric acid acidification enzyme に し seaborne て も 観 examine さ れ た の で, PXP ‐ 18 の inactivation inhibition of unseen fruit を は matrix interface し て で は な く, enzyme protein に し seaborne て 発 swing さ れ る も の と presumption さ れ る. Be international, PXP ‐ 18 が ACO と interaction し て い る こ と は, under the condition of non - で の electric 気 swimming ま た は シ ョ sugar density hook with telecentric で points draw さ れ た ACO draw points を PXP ‐ 18 に す seaborne る antibody で ウ エ ス タ ン parsing す る こ と に よ っ て in さ れ た. PXP ‐ 18 の heritage 伝 son を broken 壊 さ れ た yeast cells は, ペ ル オ キ シ ソ ー ム form に must な PAS1 heritage 伝 の broken 壊 と strains with others, active acid, raised production tonic で あ る プ ラ ム バ ギ ン に す seaborne high ま る feelings of sexual が る こ と が shows さ れ, PXP ‐ 18 が acid や hot の he に acid ス ト レ ス に す seaborne protection function る を も つ こ と が Sot された.

项目成果

Niki,T.: "Molecular interaction of nonspecific lipid-transfer protein of the yeast Candida tropicalis and peroxisomal long-chain acyl-coenzyme A oxidase to protect inhibition by acid and heat" FEBS Lett.

Niki,T.：“热带假丝酵母非特异性脂质转移蛋白与过氧化物酶体长链酰基辅酶 A 氧化酶的分子相互作用，以保护酸和热的抑制”FEBS Lett。

Bun-ya,M.: "The PAS1 homologue of the yeast Candida maltosa:Cloning,sequence analysis,and function against oxidative stress" J.Biochem.(Tokyo).

Bun-ya,M.：“麦芽糖酵母的 PAS1 同源物：克隆、序列分析和抗氧化应激功能”J.Biochem.（东京）。