酵母ペルオキシソーム蛋白質の輸送と多量体形成の分子機構

酵母过氧化物酶体蛋白转运和多聚体形成的分子机制

• 批准号: 04259220
• 负责人: 上領 達之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259220/
• 关键词: 非特異的脂質輸送蛋白質; 細胞内蛋白質輸送; ペルオキシソーム; ターゲティング信号配列; ELISA法

ペルオキシソームへの蛋白質の輸送に関して極言すると、ラットのアシル-CoA酸化酵素の場合以外には信頼するに足る定量性をもった実験系は確立されていない。分子内に分散する複数成分から構成されると推定されている酵母のアシル-CoA酸化酵素(79kDa)の輸送(ターゲティング)信号配列が未だに決定されていない理由はここにある。本研究の目的は、分散型の輸送信号配列の解析が容易な低分子量の非特異的脂質輸送蛋白質(nsLTP:14kDa)を対象に選び、定量)のある細胞内輸送系を確立することである。Candida tropicalisのnsLTPに対する特異抗体は既に調製されており、近縁異種酵母Candida maltosaでこの蛋白質コードする遺伝子の破壊株が作製されているので、nsLTPの異種酵母細胞内での輸送を免疫化学的に定量することができる。オルガネラ表面に単に付着している蛋白質の量はサンドイッチELISA法で無傷のオルガネラを測定することによって得られる筈であり、オルガネラ内部に完全に輸送された蛋白質の量は可溶化したオルガネラに対する測定値から上記の量を差し引くことによって得られる筈である。C.tropicalis細胞内でnsLTPがペルオキシソームのマトリクスに局在しているこは金コロイド標識による免疫電子顕微鏡観察で確認した。この細胞から調製したペルオキシソーム画分では検出されるnsLTP量が可溶化によって著しく流加し、ミトコンドリア画分ではそのような増加が殆ど認められなかったので、この定量法の有効性が確かめられた。そこで野生型nsLTPとその短縮型ボリペプチドを異種酵母細胞内で発現させ、さの方法でそれらの輸送を定量した結果、nsLTPのペルオキシソームへの輸送にはそのC-末端に存在する-Pro-Lys-Leuが重要であることが明らかになった。その配列は既知の輸送信号-SKLモチーフには含まれていない新しい種類である。

ペルオキシソームへのprotein transport に关して extremely words すると、ラットのアシル-CoA In addition to acidifying enzymes, the quantitative system is established based on the trustworthiness of the acidifying enzyme. Intramolecular dispersion of the plural components of the complex composition of the されると presumed yeast のアシル-CoA acidifying enzyme ( 79kDa) transmission (ターゲティング) signal arrangement is not determined by the reason why it is decided. The purpose of this study is to easily analyze the dispersed transport signal array and establish an intracellular transport system for low molecular weight non-specific lipid transport proteins (nsLTP: 14kDa) and to select and quantify them. Candida tropicalisのnsLTPに対するSpecific antibodyはJiにmodulationされており、Xenogeneic yeast Candida maltosa でこのprotein コードする 伝子の波壊区が燕れているので, Quantitative analysis of intracellular transport and immunochemistry of nsLTP in heterologous yeast cells. ELIS Method A is a non-injurious non-invasive method for measuring the quality of the skin. The inside of the ルガネラ completely transports the amount of protein and solubilizes it.対するMeasurement value からThe above-mentioned quantity を difference し cited くことによってget られる筈である. C.tropicalis Intracellular LTTP The スにbureau is in the しているこは金コロイド logo and the によるimmunoelectronic microscopic examination is confirmed.このCell から Modulation したペルオキシソームdrawing points では検出 されるnsLTP amount が soluble によって出しく流加し、ミトコンドリア画分ではそのようなincrease plus がどcognizeめらThe effectiveness of the quantitative method is correct.そこでWild type nsLTP とそのShortened ボリペプチドをIntraspecific yeast cells で発appear させ、さのmethod でそれらのTransport をQuantitative したResults, ns LTPのペルオキシソームへの Transport にはそのC-Terminal に Existence する-Pro-Lys-Leu がimportant であることが明らかになった.その配arrayはknownのtransmissionsignal-SKLモチーフには有まれていない新しいkindである.

项目成果

Niki,T.: "Molecular interaction of nonspecific lipid-transfer protein of the yeast Candida tropicalis and peroxisomal long-chain acyl-coenzyme A oxidase to protect inhibition by acid and heat" FEBS Lett.

Niki,T.：“热带假丝酵母非特异性脂质转移蛋白与过氧化物酶体长链酰基辅酶 A 氧化酶的分子相互作用，以保护酸和热的抑制”FEBS Lett。

Tan,H.: "Analysis of the import of peroxisomal nonspecific lipid-transfer protein in teast cells with the use on enzyme-linked immunosorbent assay" Cell Biochem. Funct.

Tan，H.：“使用酶联免疫吸附测定法分析过氧化物酶体非特异性脂质转移蛋白在茶细胞中的导入”Cell Biochem。