酵母ペルオキシソーム蛋白質の輸送と多量体形成の分子機構

酵母过氧化物酶体蛋白转运和多聚化的分子机制

• 批准号: 06248220
• 负责人: 上領 達之
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06248220/
• 关键词: ペルオキシソーム; 非特異的脂質輸送蛋白質; 蛋白質の高次構造; 円偏光二色性; 酵母

本研究の目的は、ペルオキシソームへ輸送された蛋白質の多量体形成機構の解明にある。ペルオキシソーム蛋白質は全て細胞質で合成され、このオルガネラへの輸送には細胞質hsp70族蛋白質の関与が報告された。従って一時的な変性状態にある蛋白質に適切な高次構造を与える分子シャペロン様蛋白質がペルオキシソームにも存在するはずであるが、未だにその報告は一例もない。我々が酵母ペルオキソームに見出してPXP-18と命名した、16kDa蛋白質がペルオキシソームのアシル-CoA酸化酵素(ACO)の熱失活を抑制したので、その詳細を調べて以下の成果を得た。1)先ず酵母Candida tropicalisの細胞内で発現されるPXP-18の75%以上がペルオキシソームに存在し、その95%以上がこのオルガネラの可溶化後に抗体と反応することを見出して、これがマトリックスに局在することを示した。免疫電子顕微鏡法によってこの結論を確認した。2)生理的なストレス温度に近い48度でACOは徐々に失活する。PXP-18はこの失活をほぼ完全に且つ特異的に抑制した。円偏光二色性の測定によれば、70度でのACOの変性は速やかで非可逆的であるが、PXP-18の変性は僅かでまた可逆的であった。PXP-18と共に70度で加温するとACOの一部はPXP-18と等モル複合体を形成し、一部は可溶性の状態で存在した。常温では等モル複合体からの可溶性ACOの解離が観察された。可溶性の部分は二次構造的にも比活性の上からも無処理のACOと殆ど区別がつかなかった。またPXP-18は、ペルオキシソーム局在性の尿酸化酵素の66度での失活、またはACOの2Mの尿素による失活を、共に有意に且つ特異的に抑制、または回復させた。

The purpose of this study was to elucidate the mechanism of protein biosynthesis in the transport system. All proteins in the cytoplasm are synthesized and transported in the cytoplasm. A report on the high order structure and molecular structure of proteins in different states of the world. We found that the yeast protein system PXP-18 and 16kDa protein system PXP-18 inhibited the thermal inactivation of ACO. 1)More than 75% of PXP-18 was found in yeast Candida tropicalis, and more than 95% of PXP-18 was found in yeast Candida tropicalis. The results of immunoelectron microscopy were confirmed. 2)Physiological temperature is approximately 48 degrees C. ACO is inactivated. PXP-18 has complete and specific inactivation inhibition. The polarization dichroism of the ACO is determined at 70 degrees. The ACO is irreversible. The PXP-18 is reversible. PXP-18 was heated to 70 degrees C. Some ACO complexes were formed and some were soluble. Dissociation of Soluble ACO from Isothermal Complex at Normal Temperature Soluble part of the secondary structure is more active than active. PXP-18 was found to have a 66-degree inactivation of uricase, a 2M inactivation of ACO, and a deliberate and specific inhibition and recovery.

项目成果

Niki,T.: "Near-stoichiometric interaction between the nonspecific lipid-transfer protein of the yeast Candida tropicalis and peroxisomal acyl-..." Yeast. 10. 1467-1476 (1994)

Niki,T.：“热带假丝酵母的非特异性脂质转移蛋白和过氧化物酶体酰基-......之间的近化学计量相互作用”酵母。