酵母ペルオキシソームに見出された抗酸素ストレス活性をもつ蛋白質

酵母过氧化物酶体中发现的具有抗氧化应激活性的蛋白质

• 批准号: 05268228
• 负责人: 上領 達之
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268228/
• 关键词: ペルオキシソーム; 非特異的脂質輸送蛋白質; アシル-CoA酸化酵素; 酵母; プラムバギン

本研究の目的は、ペルオキシソームのアシル-CoA酸化酵素(ACO)に対する失活抑制活性をもち、細胞にスーパーオキシド・ラジカル発生剤であるプラムバギンに対する耐性を賦与する、PXP-18と命名した酵母の16kDa蛋白質の作用機構とその生理的役割を明らかにすることである。ペルオキシソームの内部が常に強い酸素ストレスに曝されていること、このオルガネラへの輸送においても蛋白質は一時的な変性状態を経ることから、ペルオキシソームにも分子シャペロン様蛋白質が存在しているはずであるのに、未だに一例もその報告がない。1)PXP-18の本質を正しく理解するためには、その細胞内局在部位を明らかにしておく必要がある。細胞分画法、オルガネラの可溶化前後での酵素酵素抗体法による定量および免疫電子顕微鏡法によって、PXP-18がペルオキシソームのマトリックスに局在することを明らかにした。2)30μMのACOは生理的なストレス温度に近い48度でゆっくり失活する。PXP-18はこの失活を抑制した。円偏光二色性の測定からACOは48度では僅かにしか変性せず、70度では非可逆的に変性することが示された。一方PXP-18の70度での変性は僅かでまた可逆的であった。PXP-18の存在下に70度で加熱するとACOの一部はPXP-18と等モル複合体を形成し、一部は可溶性の状態で存在していた。可溶性の部分は二次構造的にも比活性の上からも無処理のACOと殆ど区別がつかなかった。またPXP-18は2Mの尿素で変性させたACOを有意に回復させた。これらの結果はPXP-18がペルオキシソーム内部で分子シャペロン様の役割を果たす蛋白質であることを期待させる。

The purpose of this study is to determine the effect of CoA acidifying enzyme (ACO) on inactivation inhibitory activity, cell growth, tolerance, tolerance, PXP-18, yeast, 16kDa protein and physiology. In the system, it is important to know that there is a significant change in the quality of the protein when it is sent to you, and that there is an error in the presence of protein in the system. 1) the PXP-18 is correct to understand that the intracellular location of the cell is clear that it is necessary. Cell division method, enzyme antibody method before and after lysozyme digestion were used to quantify the quantity of enzyme antibody. The immune computer micro-assay and the PXP-18 enzyme assay were used to determine the quantity of the enzyme. 2) the physiological temperature of 30 μ M "ACO" is close to 48 degrees Celsius and inactivated. PXP-18 was inactivated and suppressed. Polarizing dichroism measures ACO 48 degrees, non-reversible properties of 70 degrees, and non-reversible properties of 70 degrees. One side is PXP-18 "70 degrees." the sex is reversible. In the presence of PXP-18, there is a complex such as "PXP-18" and a "soluble" state, such as "70 degrees" plus "ACOO". The specific activity of the soluble part of the supernatant was higher than that of the soluble part, and the difference of the ACO activity of the soluble parts was different. PXP-18, 2m, urea, sex, ACO, intended to return home. The results show that the PXP-18 protein is not expected to be cut in the presence of internal molecules.

项目成果

Tan,H.: "Predominant localization of nonspecific lipid-transfer protein of the yeast Candida tropicalis in the matrix of peroxisomes" Yeast. 10(in press). (1994)

Tan，H.：“热带假丝酵母非特异性脂质转移蛋白在过氧化物酶体基质中的主要定位”酵母。