抗原受容体遺伝子の組換え認識配列に結合するRBP-Jk蛋白質の特異性の研究

RBP-Jk蛋白与抗原受体基因重组识别序列结合特异性的研究

• 批准号: 04670142
• 负责人: 川市 正史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology (1993)Kyoto University (1992)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670142/
• 关键词: RBP-Jk蛋白質; VDJ-組換えシグナル; 認識DNA配列; NF-kB認識配列; E(spl)遺伝子; 転写因子; ゲルシフトアッセイ; コア認識配列; ランダムオリゴマー

両端にPRC用のプライマー部分を持ち中央に20塩基対のランダムな配列を導入したDNAを合成し、マウスの精製したRBP-Jk蛋白質と反応させてゲルシフトアッセイで蛋白質に結合したオリゴマーを回収しPCRで増幅する。このステップを繰り返してRBP-Jk蛋白質に強く結合するオリゴマーを得てその配列を決定したところ、結合オリゴマーはCGTGGGAAをコンセンサスとする配列を共有していることが明らかになった。このようにして得られたオリゴマーを標識してプローベとしゲルシフトアッセイを行なったところ、コンセンサス配列に近い配列を持つオリゴマーほど強く結合し、V(D)J組換えのシグナル配列プローベに比べて最大12倍強く結合した。この結果は、RBP-Jk蛋白質の認識配列はV(D)J-組換えのシグナルそのものではなくCGTGGGAAをコアとする配列であることを示している。このコア配列は、転写因子NF-kBの認識配列と類似している。実際、マウスのb-2-ミクログロブリン遺伝子プロモーターのNF-kB配列はRBP-Jk蛋白質と結合した。さらに、この配列に類似した配列をプロモーター領域に持つ遺伝子を核酸のデータベースの中から検索したところ、ショウジョウバエのEnhancer of Split遺伝子群のm8遺伝子がこの配列を持っていることが明らかになった。m8遺伝子は末梢神経系の発生に関与するneurogenic遺伝子の一つであり、遺伝学的解析からRBP-Jk遺伝子機能の標的遺伝子である可能性が高いことが示されている。これらの結果はRBP-Jk蛋白質は転写因子として機能している可能性を強く示唆している。

The DNA sequence of the target protein was amplified by PCR. rbp-100 protein binding is determined by binding to rbp-100 protein. In this case, the combination of V(D) and J is up to 12 times stronger than that of C (D). The results show that RBP-Jk protein is recognized as V(D) J-component and CGTGGGAA is recognized as V (D) J-component. The cognitive allocation of NF-kB is similar to that of NF-kB. In fact, it is the b-2-kB protein that binds to RBP-Jk. In addition, this arrangement is similar to that of the m8 gene of the Split gene subgroup. m8 gene is related to the development of peripheral nervous system and neurogenic gene, genetic analysis of RBP-Jk gene function target gene is highly probable. The results show that RBP-Jk protein has a strong possibility of function.

项目成果

Tin Tun ほか: "Recognition sequence of a highly conserved DNA binding protein RBP-Jk" Nucleic Acids Res.(in press).

Tin Tun 等人：“高度保守的 DNA 结合蛋白 RBP-Jk 的识别序列”核酸研究（正在出版）。

尼川龍一ほか: "Human Jk recombination signal binding protein gene(IGKJRB):comparison with its mouse homologue" Genomics. 17. 306-315 (1993)

Ryuichi Amakawa 等人：“人类 Jk 重组信号结合蛋白基因 (IGKJRB)：与其小鼠同源物的比较”Genomics 17. 306-315 (1993)。

古川 貴久: "The drosophila homolog of the immunoglobulin recombination signal-binding protein regulates peripheral nervous system development" Cell. 69. 1191-1197 (1992)

Takahisa Furukawa：“免疫球蛋白重组信号结合蛋白的果蝇同源物调节周围神经系统发育”细胞。 69. 1191-1197 (1992)

尼川 龍一: "Human Jk recombination signal binding protein (RBP-Jk)gene:comparison with its murine homologue" Genomics. (1993)

Ryuichi Amakawa：“人类 Jk 重组信号结合蛋白 (RBP-Jk) 基因：与其鼠同源物的比较”基因组学 (1993)。