新しいアルツハイマー病関連遺伝子LRP1Bの研究

点击翻译按钮获取中文摘要

LRP1Bによるシグナル伝達機構を明らかにするために、LRP1Bの細胞内部分に結合する蛋白質を酵母Two Hybrid法によりスクリーニングした結果、JNKシグナル伝達因子群のスカフォールドとなるJIP-1b、PZDドメインを持ち膜蛋白質の局在にかかわるPICK1、低分子量G蛋白質のRanBP9、などが単離された。種々の欠失変異体やアミノ酸置換変異体の解析から、LRP1Bは、C-末端の疎水性アミノ酸領域でPICK1のPZDドメインと結合し、またNPXYモチーフでJIP-1bと結合することが明らかになった。これらの結合様式は、既に知られているPICK1やJIP-1bと他の蛋白質との結合様式と一致しており、LRP1Bとの結合が生理的な意味を持ちうる可能性を強く示唆した。そこでまず、JIP-1bがJNKのスカフォールドとして機能し、JNK活性を変化させるか検討した。293T細胞をUVで刺激しJNKを活性化させる条件でJIP-1bを強制発現させたが、JIP-1bの有無によりJNKの活性化状態に大きな変化は見られなかった。次に、グルタミン酸受容体の細胞内取り込みをPKCα依存的に促進するPICK1について、同様の活性をLRP1Bに対して示すか、293T細胞の細胞表面に発現させたLRP1B受容体をビオチン化して細胞内取り込みを定量した。PICK1の発現の有無に関係なく、LRP1Bの細胞取り込みは非常に遅かった。このため、LRP1Bと非常に良く似たLRP1について同様な検討を行なった。LRP1はLRP1Bよりもずっと強くJIP-1bとPICK1に結合した。また、LRP1は、LRP1Bに比較し非常に早い速度で細胞内へ取り込まれた。以上の結果から、LRP1BとLRP1は非常に良く似た分子であるにかかわらず、受容体として異なる挙動をとることが明らかになった。