ショウジョウバエにおけるRBP-Jk遺伝子の機能の解析

果蝇RBP-Jk基因的功能分析

• 批准号: 05263214
• 负责人: 川市 正史
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05263214/
• 关键词: ショウジョウバエ; RBP-J_K遺伝子; 認識DNA配列; 末梢神経系発生; Enhancer of Split; Neurogenic Genes; 転写調節; DNA結合ドメイン

ショウジョウバエのRBP-J_K遺伝子は、末梢神経系の発生にかかわるSuppressor of Hairlessと同一である。RBP-J_K遺伝子の作用機序を解明するため、RBP-J_K遺伝子のDNA結合の特異性を検討した。精製蛋白質が利用できるマウスのRBP-J_K蛋白質をもちいて、ランダム配列オリゴマーの中からRBP-J_K蛋白質に結合するオリゴマーを濃縮し塩基配列を決定した。この結果、マウスのRBP-J_K蛋白質はCGTGGGAAをコアとする配列を認識することが明らかになった。ショウジョウバエのneurogenic geneの一つであるEnhancer of Split遺伝子群のm8遺伝子の発現調節領域内にRBP-J_Kの認識配列が存在していた。ショウジョウバエのRBP-J_K蛋白質はm8の認識配列に強く結合した。m8は、遺伝学的解析からSuppressor of Hairlessに良って調節されている可能性の高い遺伝子であり、RBP-J_Kの標的遺伝子である可能性が高い。種々の部位のアミノ酸の置換や欠失、挿入を導入したマウスRBP-J_K蛋白質をCOS細胞で発現させ、DNA結合能を測定したところ、インテグラーゼモチーフ(230H-269H)の直前の212Kから228Yの領域と後ろの291Rから295Qの領域の変異でDNA結合能が低下した。この領域は、ショウジョウバエ、マウス、ヒトで特に高度に保存された領域でありDNA結合ドメインを構成していることが示唆された。ショウジョウバエのloss of function変異であるHG36の蛋白質はインテグラーゼモチーフ内部に点突然変異を持ち、DNA結合能は正常である。このことは、インテグラーゼモチーフが何らかの生理活性を持つことを示している。m8プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子とつなぎ、培養細胞にRBP-J_K遺伝子と共に導入するとルシフェラーゼ活性が上昇した。おそらく、RBP-J_K蛋白質は転写因子として機能し、m8遺伝子や他のneurogenic geneの活性を調節しているものと考えられる。

ショウジョウバエのRBP-J_K 伝子は, the terminal god's system の発生にかかわるSuppressor of Hairlessと同である. The mechanism of action of RBP-J_K is clear, and the specificity of DNA binding of RBP-J_K is clear. Purified protein ができるマウスのRBP-J_K protein をもちいて, ランダム arrangement オリゴThe combination of RBP-J_K protein and the concentration of RBP-J_K protein are determined by the concentration of the protein.このRESULTS, マウスのRBP-J_K PROTEIN はCGTGGGAAをコアとするmatch listをKnowledge することが明らかになった.ショウジョウバエのneurogenic geneの一つであるEnhancer of Split 伝子群のm8 伝子の発 is now recognized in the field of regulation RBP-J_Kのcognition of the existence of the split していた.ショウジョウバエのRBP-J_K protein はm8のcognition arrangement にstrongくcombinationした. m8は、The analysis of the legacy of hairlessからSuppressor of Hairlessに好って Adjustment of the probability of the legacy is highい The legacy of the legacyそ子であり、The likelihood of the legacy of the RBP-J_Kのstandard is high. RBP-J_K protein is introduced into RBP-J_K protein in COS cells, and DNA binding energy is measured.ラーゼモチーフ(230H-269H)の正前の212Kから228Yの区と后ろの291Rから295Qの区の変different and the DNA binding energy is low.この区は、ショウジョウバエ、マウス、ヒトで特に高にSavedされた地でありDNA combines with ドメインを constitutes していることが Shows instigation された.ショウジョウバエのloss of The function of the HG36 protein is that the internal points of the protein are suddenly changed, and the DNA binding energy is normal.このことは, インテグラーゼモチーフが何らかのphysiologically active をhold つことをshow している. m8プロモーターをルシフェラーゼ伝子とつなぎ, cultured cell にRB P-J_K 伝子と公に Import するとルシフェラーゼActivity がRISE した.おそらく, RBP-J_K protein は転WRITING FACTOR としてFUNCTION し, しているものと考えられる of m8 缝子やhim のneurogenic gene のACTIVITY REGULATION.

项目成果

Tin Tunほか: "Recognition sequence of a highly conserved DNA binding protein RBP-Jk" Nucleic Acids Res.(in press). (1994)

Tin Tun 等人：“高度保守的 DNA 结合蛋白 RBP-Jk 的识别序列”核酸研究（正在出版）（1994 年）。

尼川龍一ほか: "Human Jk recombination signal binding protein gene(IGKJRB):comparison with its mouse homologue" Genomics. 17. 306-315 (1993)

Ryuichi Amakawa 等人：“人类 Jk 重组信号结合蛋白基因 (IGKJRB)：与其小鼠同源物的比较”Genomics 17. 306-315 (1993)。