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糸球体腎炎自然発症マウス由来、培養メサンギウム細胞の異常反応性の分子機構の解析

自发性肾小球肾炎小鼠系膜细胞异常反应的分子机制分析

基本信息

批准号：
04670205
负责人：
武曽恵理
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.培養メサンギウム細胞株の樹立糸球体腎炎自然発症性であるddY系とRF/J系の弱齢マウスおよび正常対照としてBalb/c系マウスよりパッチクローニング法により各々いくつかの培養メサンギウム細胞株を得た。これらの細胞は免疫組織学的にアクチン陽性、サイトケラチン陰性、第VIII因子関連抗原陰性であり、またpuromycine‐aminoucleosideに抵抗性であることを確認した。これらの細胞株の顕微鏡的観察では、RF/J由来の細胞株が、他のマウス由来の細胞株では見られない集塊状の増殖パターンを呈することが特徴的であった。この所見は、本マウス系が特に早期より硬化性病変を来しやすいことから注目され、現在、細胞接着因子との関連について検討を進めている。2.血小板由来増殖因子(PDGF)に対する反応性の検討上述の培養メサンギウム細胞株のPDGF-BBに対する増殖反応を^3H-thymidineの摂取率により検討した。Balb/c由来の細胞はいずれも10ng/ml以内のPDGF-BB濃度依存性に^3H-thymidineの摂取率の増加(400〜1600%)を認めた。一方、ddY系においては摂取率の有意な増加は現在のところ認めていない。また、RF/J系においては全く反応の見られない細胞集団と低反応性(240%以下)を示す細胞系とが得られている。このような糸球体腎炎発症マウスにおける増殖反応性の低下の機序を解析するために、PDGFレセプターの異常や増殖抑制因子の関与について検討中である。3.コラーゲン合成能についての検討タイプIVコラーゲンの免疫酵素固相法(ELISA)による定量法を確立し、培養細胞上清中の濃度を測定し、マウス間で比較した。現在、RF/J系の培養上清中のタイプIVコラーゲンの濃度が、Balb/c系に比べて高い傾向がえられており、さらに検討中である。また、タイプIコラーゲンについても併せて検討中であり、今後mRNAのレベルでの解析を行う予定である。

1. Culture of cell lines in culture and establishment of glomerulonephritis natural pathogenesis, ddY line, RF/J line, weak state, normal contrast, Balb/c line, culture of cell lines in culture and establishment of cell lines. Immunohistologically, the cells were positive, the cells were negative, and the cells were puromycin-aminoside resistant. Microscopic observation of these cell lines shows that RF/J derived cell lines are characterized by a large number of colonies. This finding is particularly relevant to the early stages of sclerosing disease, and to the development of cellular adhesion factors. 2. The study of PDGF-BB response to proliferation in cultured cell lines described above was conducted in the study of H-thymidine uptake. Balb/c derived cells showed a concentration-dependent increase in PDGF-BB recovery rates up to 10ng/ml (400 - 1600%). A party, ddY system, The RF/J line is completely reactive and has low reactivity (below 240%). Analysis of the mechanism of proliferation inhibition in glomerulonephritis, PDGF and abnormal growth inhibition factors 3. The quantitative method of ELISA was established to determine the concentration in the supernatant of cultured cells. Now, RF/J system culture supernatant of the concentration of IV, Balb/c system tends to be higher than the middle, this time in the middle. The analysis of mRNA in the future is scheduled.