ヒト腸内細菌の産生する蓚酸分解酵素の精製

人体肠道细菌产生的草酸盐降解酶的纯化

• 批准号: 04670981
• 负责人: 伊藤 晴夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670981/
• 关键词: 尿路結石; 蓚酸カルシウム; 尿中蓚酸; 蓚酸分解菌; 腸内細菌; 蓚酸脱炭酸酵素

最近、ヒト腸内に蓚酸を分解する菌が存在することが報告された。このことが、腸内における蓚酸の分解・吸収ひいては蓚酸の尿中排泄量にどの程度の影響を与えているかは不明である。そこで、ヒト糞便より蓚酸分解菌を分離し、この菌体より蓚酸分解酵素を抽出分離することを試みた。Barber液体培地に成人男子糞便を約5〜10%加え、37℃、嫌気下に培養した。長期継代することにより蓚酸分解菌を選択した。蓚酸分解活性は嫌気条件下における培養時のみ維持可能であった。培養により選択された菌は数種類のグラム陰性菌の混合したものであり、まだ単一菌を得るにはいたっていない。得られた細菌をsonicationした後、冷却遠心器で12,000rpm、25分遠沈して、上清を得た。これを硫安分画し、DEAEおよびDMセルロースクロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィーをおこなった。また、活性分画のアミノ酸分析を行なった。DEAEおよびCMセルロースクロマトグラフィーの両者で酵素活性は低いNaCl濃度で溶出された。 pH7.0では蛋白の等電点に近いので陰イオンまたは陽イオン交換樹脂では充分に捕足されないためと考えられる。紫外部吸収スペクトラムにおいて、280nmにおける紫外部吸収が比較的弱いのは芳香族アミノ酸含量が少ないことをあらわしていると思われる。アミノ酸分析の結果では、グリシンとアラニンを比較的多く含み、塩基性、疎水性、および芳香族アミノ酸は少なかった。つぎの段階としては、蓚酸分解菌を同定し、1種類の菌体より酵素を分離・精製したい。腸内の蓚酸分解菌から蓚酸分解酵素を分離精製できれば、本酵素と腎結石形成との関係について、さらには結石の再発予防、結石溶解などへの応用の可能性についても検討できるであろう。

Recently, the presence of bacteria in the intestine has been reported. The effect of acid decomposition and absorption in the intestine on the excretion of acid in the urine is unknown. Isolation of acid-decomposing bacteria from feces, isolation of acid-decomposing enzymes from bacteria, and isolation of acid-decomposing enzymes from feces Barber liquid culture adult male feces about 5 ~ 10%, 37℃, under ambient conditions Long-term development of acid decomposing bacteria The activity of acid decomposition can be maintained in culture under different conditions. Culture is a process of selecting bacteria from a variety of negative bacteria and mixing them with each other. After obtaining the bacteria sonification, cooling the telecentre at 12,000 rpm, 25 minutes of remote precipitation, supernatant was obtained. The first step is to reduce the risk of damage to the environment. The analysis of acid in the active fraction was carried out. The enzyme activity of DEAE and CM is dissolved at low NaCl concentration. The isoelectric point of the protein is close to pH 7.0. UV absorption at 280nm is relatively weak and aromatic acid content is relatively low. The results of the acid analysis show that the acid content is higher than that of the basic, hydrophobic and aromatic acids. To isolate and purify the enzyme, the enzyme of one kind of bacteria was identified. Enteric acid-decomposing bacteria and acid-decomposing enzymes are isolated and purified, the relationship between this enzyme and kidney stone formation is discussed, and the possibility of stone re-development and stone dissolution is discussed.

项目成果

伊藤 晴夫: "カルシウム含有結石患者の栄養調査" 泌尿器科紀要. 38. 9-14 (1992)

Haruo Ito：“含钙结石患者的营养调查”泌尿外科通报 38. 9-14 (1992)。

伊藤 晴夫: "別冊・医学のあゆみ 腎疾患state of arts Polycystic kidney disease" 医歯薬出版, 4 (1992)

伊藤晴夫：“另册：医学史现状多囊肾病”石药出版社，4（1992）

伊藤 晴夫: "尿検査法 12.有機酸 (3)シュウ酸" 検査と技術 増刊号. 20. 146-147 (1992)

Haruo Ito：《尿液检测方法 12. 有机酸 (3) 草酸》检测与技术特刊 20. 146-147 (1992)。

伊藤 晴夫: "ヒト腸内細菌の産生する蓚酸分解酵素の部分精製" 日本泌尿器科学会雑誌. 83. 1395-1399 (1992)

Haruo Ito：“人体肠道细菌产生的草酸盐降解酶的部分纯化”日本泌尿外科协会杂志 83. 1395-1399 (1992)。

H. Ito: "Reduction of urinary oxalate by combined calcium and citrate administration without increase in urinary calcium oxalate stone formers" Clinical Nephrology. 37. 14-18 (1992)

H. Ito：“通过钙和柠檬酸盐联合给药减少尿草酸盐，而不增加尿草酸钙结石形成物”临床肾脏病学。