ヒト腸内細菌の産生する蓚酸分解酵素の精製

人体肠道细菌产生的草酸盐降解酶的纯化

• 批准号: 05671337
• 负责人: 伊藤 晴夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671337/
• 关键词: 尿路結石; 蓚酸カルシウム; 尿中蓚酸; 蓚酸分解菌; 腸内細菌; 蓚酸脱炭酸酵素

ヒト腸内細菌より蓚酸分解菌を分離し、その菌体より蓚酸分解酵素を精製する試みを続けている。蓚酸分解活性を示す菌体より蓚酸分解酵素を部分精製したことはすでに報告した。しかし、この場合は数種類の菌の混合したものが活性を示したのであって、一つの菌の純粋培養には成功していなかった。今回はまず、活性を有する菌の純粋培養を試みた。この混合培養物をBarber培地から蓚酸を除去した培地に継代し、ペニシリンの共存下で3〜4日間培養することにより蓚酸分解菌の濃縮を行なった。この菌をBarber培地の改変寒天培地にプレーティングし、3〜4日間培養した。生育してくるコロニーを釣菌し、Barber培地で培養し、蓚酸分解活性を有する菌を得た。この菌は好気条件下では生育せず、嫌気条件下でのみ生育した。本菌は桿菌であり、グラム染色によりグラム陽性菌であった。また、芽胞形成はみられなかった。嫌気性菌の同定キットによる検査でEubacterium lentumと同定された。本菌を大量に培養し、あらためて、その菌体よりの蓚酸分解酵素の精製を試みた。菌体を9倍量のリン酸緩衝液に懸濁させ、超音波処理を行い、遠心上清を粗酵素液とした。蓚酸分解活性の発現のためにはcofactorとして、コハク酸、ATP,CoA,TPP,Mgイオンを必要とし、このうちのどれが欠けても活性は消失した。硫安50-60%飽和で分画し、その後にButyl-Sepharoseクロマトグラフィーをおこない活性分画を得た。活性画分をさらにDEAE-Sepharoseクロマトグラフィーにかけると活性は失われた。これらのことより、2つの酵素により蓚酸分解が行なわれることが示唆された。したがって、今後はoxalyl-CoAをつくらせる酵素とoxalyl-CoA decarboxylaseとを別々に精製してゆく予定である。

Isolation of intestinal bacteria and purification of acid-decomposing enzymes The activity of acid decomposition is reported. In this case, the mixture of several kinds of bacteria and the activity of one kind of bacteria are successfully cultivated. This time, the bacteria were cultured in pure medium with high activity. The mixed culture was cultured for 3 to 4 days, and the acid was removed. The bacteria were cultured in cold weather for 3 to 4 days. Fertility, Barber culture, Acid decomposition activity The bacteria are fertile under good conditions and fertile under bad conditions. This bacterium is a positive bacterium.また、芽胞形成はみられなかった。The identification of pathogenic bacteria and the identification of Eubacterium luntum This bacterium is cultivated in large quantities, and the acid-decomposing enzymes in the bacteria are refined carefully. 9 times the amount of bacteria in the acid buffer suspension, ultrasonic treatment, remote purification of crude enzyme solution The activity of acid decomposition is necessary for cofactor, ATP,CoA,TPP,Mg, etc. Thionine 50-60% saturation, then Butyl-Sepharose, then active. The activity of DEAE-Sepharose was reduced. 2. The enzyme is responsible for acid decomposition. In the future, oxalyl-CoA decarboxylase and oxalyl-CoA decarboxylase will be refined.

项目成果

Haruo Ito et al: "Incidence and Clinical Features of Renal Tubular Acidosis-1 in Urolithiasis" Urologia Internationals. 50. 82-85 (1993)

Haruo Ito 等人：“尿石症中肾小管酸中毒 1 的发病率和临床特征”Urologia Internationals。

Tadashi Kotake,Naoto Miura,Haruo ito: "Renal Tubular Hypouricemia and Calcium Uroithiasis" Scanning Microscopy. 7. 417-421 (1993)

Tadashi Kotake、Naoto Miura、Haruo ito：“肾小管低尿酸血症和钙尿结石”扫描显微镜。

伊藤晴夫他: "腎結石の生成を抑制する尿中因子" 千葉医学. 69. 215-221 (1993)

Haruo Ito 等：“抑制肾结石形成的泌尿因素”千叶医学科学 69. 215-221 (1993)

Haruo Ito et al: "Evaluation and Management of Dietary Habits in Japanese Renal Stone Formers" Scanning Microscopy. 7. 409-415 (1993)

Haruo Ito 等人：“日本肾结石形成者饮食习惯的评估和管理”扫描显微镜。

伊藤晴夫: "尿路結石と栄養指導" 月刊保団連. 3. 61-65 (1993)

伊藤晴夫：《尿路结石与营养指导》月刊《Hodanren》3. 61-65 (1993)。