ヒト腸内の嫌気性菌の産生する蓚酸デカルボキシラーゼの精製

人肠道厌氧菌产生的草酸脱羧酶的纯化

• 批准号: 06671616
• 负责人: 伊藤 晴夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671616/
• 关键词: 尿路結石; 蓚酸カルシウム; 腸内細菌; 蓚酸分解菌; 薬剤感受性; 蓚酸分解酵素; 再発予防

ヒトの糞便中より蓚酸を分解する菌を分離し、これがEubacterium lentumであることは既に報告した。これはDNA-DNA hybridization法による、遺伝子による分類でも確かめられ、Eubacterium lentum WYH-1と命名した。この菌の各種抗生剤に対する感受性を調べると、日常よく使用する薬剤にも感受性を示し、胆汁の成分であるデオキシコール酸によってもその発育が抑制された。この菌体のcell-free extractはco-factorとしてsuccinate,CoA,ATP,Mg,thiamin pyrophosphateの存在下で高い蓚酸分解活性を示した。succinate,CoA,ATP,Mgはsuccinyl-Co Aに置き換えることが出来た。Sephacryl S-300HRを用いて硫酸アンモニウム沈殿30-70%画分を分子篩クロマトグラフィーすることにより、succinate,CoA,ATP,Mgよりsuccinyl-CoAを生成するsuccinate:CoA ligase、succinyl-CoAをoxalyl-CoAに変えるsuccinyl-CoA transferase、oxalateをformateに変えるoxalyl-CoA decarboxylase、およびformyl-CoA transferase活性を有する分画を得ることが出来た。このように、この菌における蓚酸分解に関与する酵素は4つと予想された。Oxalyl-CoA decarboxylase活性のある画分をDEAE Cellulofine、およびPhenyl Sepharoseで精製すると、比活性が9.2U/mgの酵素が得られた。SDS-PAGEでみると、ほとんど単一のバンドであることが判明した。分子量はゲル瀘過より約200kDa,SDS-PAGEより約62kDaであるのでtetramerを形成していると予想された。Formyl Co-A transferaseをDEAEセルローズクロマトグラフィーにかけると、その比活性を約0.8U/mlまで上げることが出来た。現在、この外の酵素の単離も試みている。

The bacteria in the feces were isolated and the bacteria in the feces were isolated. DNA-DNA hybridization method is used to classify and identify Eubacterium. The sensitivity of the bacteria to various antibiotics is modulated, and the sensitivity of the antibiotics to daily use is indicated. The development of the bile is inhibited by the components of the bile. The cell-free extract of the bacteria showed high acid decomposing activity in the presence of co-factor and succinate,CoA,ATP,Mg,thiamin pyrophosphate. Succinate,CoA,ATP,Mg succinyl-Co A Sephacryl S-300HR is prepared by using sulfuric acid as solvent and 30-70% as solvent. Succinate,CoA,ATP,Mg and succinyl-CoA are produced. Succinate:CoA ligase, succinyl-CoA oxalyl-CoA transferase, oxalate and formyl-CoA transferase are produced. This is the first time that we've seen this. Oxalyl-CoA decarboxylase activity was determined by DEAE Cellulose and Phenyl Sepharose purification. The enzyme activity was 9.2 U/mg. SDS-PAGE The molecular weight is about 200kDa,SDS-PAGE is about 62kDa, and the tetramer is formed. Formyl Co-A transferase has a specific activity of about 0.8U/ml. Now, this enzyme is isolated from the body.

项目成果

鈴木 文夫,伊藤 晴夫,Eli.K.Michaels: "Nephrocalcin:原発性腎細胞癌の新たな腫瘍マーカーとしての有用性について" 泌尿器外科. 7. 783-786 (1994)

Fumio Suzuki、Haruo Ito、Eli. K. Michaels：“肾钙素：其作为原发性肾细胞癌新肿瘤标志物的用途”，《泌尿外科》7. 783-786 (1994)。

正井 基之,伊藤 晴夫: "主な疾患の病態・臨床症状・治療・予後(3)腎尿管結石" 臨床看護. 20. 1615-1620 (1994)

Motoyuki Masai，Haruo Ito：“主要疾病的病理学、临​​床症状、治疗和预后（3）肾输尿管结石”临床护理20。1615-1620（1994）。

Y.Nakagawa,M.Netzer,E.K.Michaels,F.Suzuki,H.Ito: "Nephrocalcin in patients with renal cell carcinoma" The Journal of Urology. 152. 29-34 (1994)

Y.Nakakawa、M.Netzer、E.K.Michaels、F.Suzuki、H.Ito：“肾细胞癌患者中的肾钙素”泌尿学杂志。

伊藤 晴夫 他: "ヒト糞便中の蓚酸分解菌の分離・同定" 医学のあゆみ. 169. 1259-1260 (1994)

Haruo Ito 等人：“人类粪便中草酸盐降解细菌的分离和鉴定”医学史 169. 1259-1260 (1994)。

Haruo Ito et al: "Effect of Ethyl Icosapentate on Urinary Calcium Excertion in Calcium Oxalate Stone Formers" Urologia Internationalis.

Haruo Ito 等人：“二十碳五酸乙酯对草酸钙结石形成者尿钙排泄的影响”《国际泌尿外科》。