家蚕核多角体病ウイルスゲノムの複製機構:レプリコンと宿主由来DNA結合蛋白質

家蚕核型多角体病毒基因组复制机制：复制子与宿主DNA结合蛋白

• 批准号: 05806008
• 负责人: 橋本 義文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05806008/
• 关键词: 昆虫培養細胞; 昆虫ウイルス; 遺伝子; 複製; DNA結合蛋白質

家蚕核多角体病ウイルス(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)のゲノムDNAの特徴の1つとして、相同性反復塩基配列(homologous region,hr)の存在が挙げられる。このhrはゲノムDNAに計5カ所、約20-30kbpの間隔で分散しているが、非構造遺伝子領域にもかかわららず、同じバキュロウイルス科に属するAutographa californica MNPV(AcMNPV)のhrと非常に相同性が高く、基本的な構造もよく似ている。BmNPV hr4は上流あるいは下流に存在する構造遺伝子から判断して、AcMNPV hr5に相当する位置に存在している。HindIII-Lフラグメント内の82.3-84.0m.u.(2150bp)をsequencingした結果、BmNPV hr4は約700bpで82.6-83.1m.u.に存在していた。hr4内には2種類の繰り返し配列が認められ、それらはEcoRIの認識部位を中心とする26bpの不完全palindrome及びadenine,thymineをclusterとする13bpのAT-rich sequenceであった。Bm-NPV hr4に存在するpalindrome,AT-rich sequenceをプローブとしてgel shift assayを行ったところ、両構造に対してBmN4細胞の核蛋白質が特異的に結合することが認められた。また、palindromeに対しては感染後24hr以降にウイルス由来の蛋白質が結合することも認められた。AcMNPV hr5において、これらの構造にはIE-1 geneの遺伝子産物が結合することしか認められておらず、宿主細胞由来の核蛋白質が結合するかどうか確認されていない。このようにBmN4細胞由来の因子が顕著にBmNPV hr4のpalindrome,AT-rich sequence構造に結合することは、hrが宿主由来の因子を利用してDNA複製等、宿主とウイルスの相互作用に大きな役割を担っていると考えられた。また、両hrにおける核蛋白質の結合様式の違いは、これらの構造が両ウイルスのhrにおいて同一な構造をとっていることから宿主細胞側によるものであると考えられた。

The existence of BmNPV (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus) requires DNA characterization and homologous region (hr). This hr is very similar to Autographa californica MNPV(AcMNPV), which is composed of five DNA fragments, separated by about 20-30kbp, and non-structural fragments. BmNPV hr4 is located upstream and downstream of the structure, and AcMNPV hr5 is located downstream. HindIII-L 82.3-84.0m.u. (2150bp) sequencing results, BmNPV hr4 is about 700bp, 82.6-83.1m.u. exists. hr4. The 2 species of EcoRI are clustered in the 26bp incomplete palindrome and adenine,thymine cluster in the 13bp AT-rich sequence. Bm-NPV hr4 cells have palindrome,AT-rich sequence, and specific binding to nuclear proteins of BmN4 cells. 24 hours after infection, the protein binding of the virus was reduced. AcMNPV hr5 is constructed to bind to IE-1 gene protein products and host cell derived nuclear proteins. BmN4 cell-derived factors are linked to BmNPV hr4 palindrome,AT-rich sequence constructs, host-derived factors are utilized, such as DNA replication, host-derived interactions, etc. The binding pattern of nuclear protein in the host cell is different from that in the host cell.

项目成果

橋本義文: "家蚕核多角体病ウイルスの欠損ゲノムの生成" 日本応用動物昆虫学会誌. 37. 240-243 (1993)

Yoshifumi Hashimoto：“蚕核多角体病毒缺陷基因组的生成”日本应用动物学和昆虫学会杂志 37. 240-243 (1993)。