細胞核に存在する新しいホスホリパーゼA_2の構造と機能

细胞核中新型磷脂酶 A_2 的结构和功能

• 批准号: 05808054
• 负责人: 小泉 恵子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05808054/
• 关键词: ホスホリパーゼA_2; 細胞核; 肝癌; 再生肝

1.細胞核に存在するアルカリ性および中性ホスホリパーゼA_2(PLA_2)をそれぞれ高純度に精製することに成功した。(1)アルカリ性PLA_2の精製-ラット腹水肝癌細胞(AH7974)より分離精製した核を1%TritonX-100で処理して膜欠損核とし、それにDNaseおよびRNaseを作用させた後、0.25M(HN_4)_2SO_4可溶性画分を調製した。この画分をSephacryl S-300カラムおよびII型PLA_2抗体を用いたアフィニティカラムで順次精製したところ、SDS-PAGEで14kDaの位置にほぼ単一バンドを示すPLA_2標品が得られた。今後、このPLA_2のアミノ酸配列を調べ、既知のII型PLA_2のアミノ酸配列と比較検討する予定である。(2)中性PLA_2の精製-2M KCl溶液中でラット腹水肝癌細胞(AH7974)より分離精製した核を超音波処理し、得られた可溶性画分について順次4種類のカラムクロマトグラフィを行い、中性PLA_2を3500倍に精製することができた。分子量はゲルろ過カラムクロマトグラフィにより33kDaであることが判明した。ラット成熟静止肝細胞核より同様にして中性PLA_2を精製したところ、分子量は67kDaであった。今後、これら酵素の抗体を作製する予定である。2.アルカリ性および中性PLA_2の核内分布について検索を行った。核に存在するアルカリ性PLA_2はほぼ90%以上がクロマチンに強固に結合していることが判明した。一方,中性PLA_2はクロマチン画分とマトリックス画分の両方に存在した。

1. The nuclei exist に す る ア ル カ リ sex お よ び neutral ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 (PLA_2) を そ れ ぞ れ high-purity に refined す る こ と に successful し た. (1) ア ル カ リ sex PLA_2 の refined ラ ッ ト ascites liver cancer cells (AH7974) よ り separation of refined し た nuclear を 1% TritonX - 100 で 処 Richard し て membrane owe damage of nuclear と し, そ れ に DNase お よ び RNase を role さ せ た, 0.25 M (HN_4) _2SO_4 soluble after drawing points を modulation し た . こ の draw points を Sephacryl S - 300 カ ラ ム お よ び antibody of type II PLA_2 を with い た ア フ ィ ニ テ ィ カ ラ ム で progressive refined し た と こ ろ, sds-page で 14 kda の position に ほ ぼ 単 a バ ン ド を shown す PLA_2 standard が had ら れ た. In the future, こ の PLA_2 の ア ミ ノ acid with column を べ, both known の II PLA_2 の ア ミ ノ acid with column と compare beg す 検 る designated で あ る. (2) neutral PLA_2 の refined - 2 m KCl solution で ラ ッ ト ascites liver cancer cells (AH7974) よ り separation of refined し た nuclear を ultrasound 処 し, happily ら れ た soluble draw points に つ い て in order 4 kinds の カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ を い, neutral PLA_2 を 3500 times に refined す る こ と が で き た. The molecular weight of ゲ ゲ ろ is determined by カラム ロ ロ トグラフィによ トグラフィによ た 33kDaである である とが. Youdaoplaceholder0 mature stationary liver cell nuclei よ よ similar に て て neutral PLA_2を refined <s:1> たと たと ろ ろ molecular weight ラット 67kDaであった. In the future, the production of する れら enzyme <s:1> antibody を will be determined する. 2. Youdaoplaceholder0 カリ カリ sex および neutral PLA_2 is distributed in the nucleus に ア て検 て検 て検 cords を rows った. Nucleus に す る ア ル カ リ sex PLA_2 は ほ ぼ 90% が ク ロ マ チ ン に strong に combining し て い る こ と が.at し た. On one side, there is a neutral PLA_2 <s:1> ロ ロ ロ チ <e:1> score と トリッ ス score <s:1> on both sides に there exists a た た.

项目成果

大石尚史: "細胞核ホスホリパーゼA_2の核内局在性" 生化学. 65. 715 (1993)

Naoshi Oishi：“核磷脂酶 A_2 的核定位”生物化学 65. 715 (1993)。

小泉恵子: "細胞内オルガネラにおけるホスホリパーゼA_2の特性と機能" 実験医学. 11. 55-59 (1993)

小泉惠子：“细胞内细胞器中磷脂酶 A_2 的特性和功能”实验医学。 11. 55-59 (1993)