アフリカツメガエル卵無細胞系の核膜形成とホスホリパーゼD

非洲爪蟾卵无细胞系统中核膜的形成和磷脂酶 D

• 批准号: 10878095
• 负责人: 小泉 恵子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878095/
• 关键词: アフリカツメガエル; ホスホリパーゼ D; 核膜; ホスファチジン酸

本研究の目的はアフリカツメガエルの卵無細胞系での被膜形成におけるホスホリパーゼ Dの関与を検索することである。実験系はアフリカツメガエルの卵をCa^<2+>ionophpreA23187で活性化したのち遠心して得られた卵母細胞抽出液(egg extract)ならびにDNAとしてウシ胸腺より調製した2本鎖DNA(dSDNA)およびTritonX-100処理により脱膜したラット肝の核〈脱膜核〉を用いた。今回明らかにする事の出来た事柄を以下に示す。1。 アフリカツメガエルのegg extract中に存在するホスホリパーゼ Dの分子種の同定抗体を用いて検索した結果、アフリカツメガエルのeggα廿社中にはホスホリパーゼ D2は検出されず、PIP2依存性のホスホリパーゼ D1の存在が確認された。2。 アフリカツメガエルの卵無細胞系におけるホスファチジン酸の生成egg extractをdsDNAまたは脱膜核の存在下、^<14>Cホスファチジルコリンと37度でインキュベートすると、DNA依存性のホスファチジン酸の生成が非常に早い時間帯、5分以内とそれよりやや遅れて20-30分後の2度にわたって認められた。前者の生成はネオマイシンにより阻害され、後者の生成はR59022により阻害された。また、ジアシルグリセロールの生成がインキュベート後10分前後に見られた。以上の結果はホスファチジン酸の生成がPIP2依存性のホスホリパーゼ Dlによる経路とジアシルグリセロールを経由する経路の2つの経路によることを示している。3。 アフリカツメガエルの卵無細胞系におけるホスファチジン酸生成と核膜形成との関連性核膜形成はDHCC試薬を用いて、蛍光顕微鏡およびFlow cytometryで観察した。核膜形成はネオマイシンで阻害され、それはホスファチジン酸の添加により部分的に回復した。1-3の結果は核膜形成にPIP2依存性のホスホリパーゼ Dlが関与していることを強く示唆している.

The purpose of this study is to investigate the relationship between the formation of envelope and egg cell-free system. In this case, the activation of Ca^<2+>ionophpreA23187 in oocyte extract and DNA modulation in thymic DNA(dSDNA) and Triton X-100 treatment in liver nucleus were investigated. The following is an example of what happened today. 1。The presence of a specific antibody to the molecular species of D in the egg extract was detected in the results, and the presence of a specific antibody to the molecular species of D in the egg extract was confirmed in the presence of D2. 2。In the presence of a membrane-free <14>nucleus, the protein is produced at 37 degrees C., and the DNA dependent protein is produced at 20-30 minutes C. The former is generated by the resistance of R59022, and the latter is generated by the resistance of R59022. 10 minutes after the launch of the first round of the World Cup, the United States will launch a new round of World Cup competitions. The above results show that the formation of acid depends on PIP2, and the process is dependent on PIP 2. 3。The relationship between acid production and nuclear membrane formation and nuclear membrane formation was investigated by DHCC assay, optical microscopy and Flow cytometry. Nuclear membrane formation is a process of inhibition and recovery. 1-3 The results show that PIP2 is dependent on nuclear membrane formation.

项目成果

C.Isogai: "Analysis of bax protein in sphingosine-induced apoptosis in human leukemic cell line TF1 and its bcl-2 transfectants." Exp. Hepatol.26. 1118-1125 (1998)

C.Isogai：“人白血病细胞系 TF1 及其 bcl-2 转染子中鞘氨醇诱导的细胞凋亡中 bax 蛋白的分析。”

K.Tugane: "A possible role of nuclear ceramide and sphingosine in hepatocyte apoptosis in rat liver." J. Hepatol.in press. (1998)

K.Tugane：“核神经酰胺和鞘氨醇在大鼠肝脏肝细胞凋亡中的可能作用。”