新規糖鎖切断酵素の気固系流動層型バイオリアクターによる生産とセルラーゼの糖鎖解析

使用气固流化床生物反应器生产新型聚糖裂解酶并分析纤维素酶糖链

• 批准号: 06650909
• 负责人: 谷口 正之
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06650909/
• 关键词: 糖鎖切断酵素; バイオリアクター; 固体培養; セルラーゼ

本研究では、1)バイオリアクターを用いたMucor hiemalisの固体培養によって糖鎖切断酵素(Endo-β-GlcNAc-ase)の生産性を高める培養条件について検討した。また、2)生産した本酵素を用いて、セルラーゼ中の糖鎖の役割について検討した。これらの結果は、以下のようにまとめられる。1.既に報告されている培地を用いた液体培養と小麦ふすまを用いた固体静置培養の間で菌体外Endo-β-GlcNAc-ase生産量を比較した結果、固体静置培養において菌体の生育量は多くなり、酵素生産量も著しく多くなった。2.Mucor hiemalisの固体静置培養によるEndo-β-GlcNAc-aseの生産に対する初期水分含量の影響を検討した結果、60%に調節したときに酵素生産量は最大となった。3.横型回転バイオリアクターを用いた固体培養によるEndo-β-GlcNAc-aseの生産について検討した結果、初期水分含量を60%に調節し、1時間ごとに2rpmで3分間間欠的に回転した場合に酵素生産量は最も多くなった。4.陰イオン交換クロマトグラフィーと等電点電気泳動によって単一に精製したカビ起源のセルラーゼ成分に対して、生産したEndo-β-GlcNAc-aseを作用させて脱糖鎖を行った。その結果、セルラーゼ成分はSDS電気泳動によって分子量の低下が観察された。また、脱糖鎖したセルラーゼを用いて諸性質を検討した結果、糖鎖は熱安定性に関与していることが示唆された。

In this study, we investigated the production of Endo-β-GlcNAcase in solid culture of Mucor himalis. 2) The enzyme is produced in the presence of a sugar chain. The result is: 1. In this paper, we compare the production of Endo-β-GlcNAcase in vitro between liquid culture and solid static culture of wheat. The results show that the production of Endo-β-GlcNAcase in solid static culture is more than that in liquid culture. 2. The effect of initial moisture content on the production of Endo-β-GlcNAcase in solid state culture of Mucor hiemalis was investigated. The enzyme production was maximum at 60% regulation. 3. In the case of horizontal rotation, the initial moisture content was adjusted to 60%, and the enzyme production was the highest when the rotation time was 2rpm and 3 minutes. 4. In addition, the enzyme activity of β-GlcNAc-ase was also studied. The results showed that the molecular weight of the components was lower than that of SDS electrophoresis. The results of the investigation of the properties of the sugar chain and the thermal stability of the sugar chain are as follows