遺伝子近傍の多型性を利用したMVR-PCR法による微量混合斑痕からのアリル分析

使用 MVR-PCR 方法利用基因附近的多态性对微量混合点进行等位基因分析

基本信息

批准号：
06670455
负责人：
玉木敬二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670455/
关键词：
法医学 MVR-PCR DNAタイピング個人識別ミニサテライト MS32 アリル分析

项目摘要

DNAフィンガープリント法に始まるミニサテライトDNAを用いた検査法は個人識別などの法医学領域で広く利用されているが、現在のところ個々のミニサテライトの長さの差のみを情報として使用している。ところが、ミニサテライトの内部の変異をマッピングするMVP-PCR法の開発により、さらに多くの情報が得られるようになった。また、ミニサテライト近傍(フランキング領域)の多型性を利用することにより、ゲノムDNAから個人のアリルをタイプできるようになった。我々はこれらの方法を用いて日本人のMS32アリルを数多く調査し、血痕や精液班などの微量な法医資料の分析にも応用し検討した。また、これらの研究結果をもとに、実際の法医資料の分析に応用した。全身に火傷を覆い腐敗も進んだ身元不詳の嬰児が分離された胎盤とともに焼却炉内で発見されたが、この2つの法医資料よりどれだけ個人識別に有用な情報が得られるかを検討した。まず、比較のために従来のDNA検査(SLP、AmpFLP、HLA-DQA1、STR)をおこなったが、HLA検査を除く3つの検査では胎盤だけに存在するアリルを検出されず、嬰児のDNA型のみがタイピングされた。また、HLA検査では3つ以上のアリルの混合が示唆されたが、それぞれ実際のDQA1型を決定できなかった。それに対し、通常のMVR-PCRでは嬰児DNAからは明確なdiploidコードを読み取ることができ、2つのアリルを分離してhaploidコードを読むことも可能であった。また、胎盤組織では3つ以上のアリルが混合していることがわかり、上記3つのフランキング(近傍)領域の多型性をタイピングしたところ、嬰児DNAと胎児DNAで異なっていたため、アリル特異的MVR-PCRにより、胎盤に含まれる微量な母親由来のアリルのタイピングに成功した。これらのアリルをデータベース内にある今までにタイピングされたアリルと比較したところ、ホモロジーの高いアリルは日本人のアリルだけであった。このため、嬰児や母親は日本人である可能性が強く示唆された。このように、混合斑痕などの3つ以上のアリルの混ざった資料からでも、フランキング多型を用いることによりアリルの分離及びマッピングが可能となり、MVR-PCR法は極めて個人識別能の高い検査であることが示された。

使用Minisatellite DNA从DNA指纹方法开始的测试方法被广泛用于法医领域，例如个人鉴定，但目前仅将单个迷你剧层长度的差异用作信息。但是，MVP-PCR方法的开发绘制了Minisatellites中的突变，这导致了更多信息。此外，通过利用微型层（侧翼区域）附近的多态性，已经有可能从基因组DNA中键入单个等位基因。我们使用这些方法研究了许多日本等位基因，并将其应用于对少量法医材料（例如血迹和精液层）的分析。此外，根据这些研究结果，我们将它们应用于实际法医材料的分析。一个不知名的孩子在焚化炉中与孤立的胎盘一起发现了一个不知名的孩子，他的身体和腐烂的胎盘被发现，我们检查了从这两个法医文档中获得了多少可用于个人识别的信息。首先，进行了常规的DNA测试（SLP，AMPFLP，HLA-DQA1和STR）进行比较，但是除HLA测试以外的三个测试未检测到胎盘中存在的等位基因，并且仅键入了婴儿的DNA类型。此外，尽管HLA测试表明将三个或更多等位基因混合在一起，但无法确定实际DQA1类型。相比之下，正常的MVR-PCR允许从婴儿DNA读取明显的二倍体代码，并且可以分开两个等位基因并读取单倍体代码。此外，发现在胎盘组织中混合了三个或多个等位基因，当我们键入上面的三个侧翼（附近）区域的多态性时，婴儿的DNA与胎儿DNA的DNA之间的差异，因此我们成功地键入了少量的sellelel placenta中包含的等位基因sellelelic-pecccr。当将这些等位基因与数据库中的先前键入等位基因进行比较时，日本等位基因是唯一具有高同源性的等位基因。这强烈表明婴儿和母亲可能是日本人。因此，即使从包含三个或更多等位基因（例如混合标记）的材料中，侧翼多态性的使用也可以使等位基因的分离和映射，这表明MVR-PCR方法是一种非常能够识别个体的能力。