C型慢性肝炎における肝細胞障害機序に関する検討

慢性丙型肝炎肝细胞损伤机制研究

• 批准号: 06670526
• 负责人: 田中 雄二郎
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670526/
• 关键词: C型慢性肝炎; C型肝炎ウイルス; 細胞障害; アポートシス

C型慢性肝炎における細胞障害機序を解明する端緒とすべく、我々はC型肝炎ウイルス感染肝細胞にアポトーシスが起こりつつあるか否かを以下のNICK END LABELLINGを用いて組織切片上で検証した。即ちIN SITUハイブリダイゼーションを用いでウイルス感染細胞を検出、連続切片を用いてNICK END LABELLNGによって検出されたアポートシスをおこしている細胞との関係を検討した。方法NICK END LABELLINGアポートシスに特徴的な所見であるDNAの断裂(nick)を組織切片上で検出する方法で(J Cell Biology)で、具体的にはnickをterminal transferaseによりbiotin-dUTPで末端標識しalkaline-phosphatase labelled avidin-biotin complexにて検出する。IN SITU ハイブリダイゼーション組織上でC型肝炎ウイルス感染細胞を検出するためcore領域から360塩基対のcDNAzを製作し、PCRにてdigoxigeninを標識増幅しこれをプローブとしてin situハイブリダイゼーションを行った。結果NICK END LABELLINGにてDNAが断裂が認められたのはC型慢性肝炎症例20例の検討では、主に間葉系細胞であり、肝細胞にはごく一部であった。また、C型肝炎ウイルス感染は、間葉系細胞には認められず、肝細胞に限局していた。DNAの断裂とC型肝炎ウイルス感染が同時に認められた細胞は存在しなかった。考察DNAの断裂が認められてから、細胞が融解するまでの時間はIN VITROの検討では、6-7時間といわれる。これを考慮するとNICK END LABELLINGでは、アポトーシスを過小評価している可能性がある。しかし、これを考慮しても、多数例の検討で、全くC型肝炎ウイルス感染細胞にDNAの断裂が認められなかったことは、アポトーシスがC型慢性肝炎の細胞障害機序の主体を占めている可能性が低いことを示唆している。

The mechanism of cellular damage in chronic hepatitis C is explained in detail. Hepatitis C infection in liver cells is detected by NICK END LABELLING. In other words, the relationship between the infected cells and NICK LABELLNG is discussed. Methods NICK END LABELLING was used to detect DNA nick in tissue sections. Methods (J Cell Biology) were used to detect nick in terminal transfer, biotin-dUTP, alkaline-phosphatase labeled avidin-biotin complex. In SITU, hepatitis C virus infection cells were detected in the core area, and the cDNA was amplified by PCR. Results NICK END LABELLING DNA fragmentation was identified in 20 patients with chronic hepatitis C. Hepatitis C virus infection, mesenchymal cell infection, liver cell infection DNA fragmentation and hepatitis C infection are also recognized as the presence of DNA fragmentation. To investigate the time of DNA fragmentation, cell lysis, and IN VITRO DNA fragmentation, 6-7 days later. Consider the possibility that NICK LABELLING is too small. In most cases, hepatitis C virus infection is associated with DNA fragmentation, and the probability of DNA fragmentation in hepatitis C virus infected cells is low.