Duchenne型筋ジストロフィーの遺伝子治療の試み-mdxマウスを用いて-

杜氏肌营养不良症的基因治疗尝试 - 使用 mdx 小鼠 -

• 批准号: 06670790
• 负责人: 乾 幸治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670790/
• 关键词: clystrophin; HVS-Iiposome; 遺伝子治療; mdxマウス

目的)昨年度、dystrophin欠損筋ジフトロフィーモデルマウス(mdx mouse)へのin vivoにおけるヒトdystrophinの一過性発現をHVJ-Iiposome法を用いて行い報告した。本年度は、培養mdx mouse myoblastに対してin vitroでHVJ-Iiposome法を用いたdystrophinの発現を行った。またBecker型dystrophin mini gene(6.3Kb)の発現をretrovirus vectorに成功したので報告する。対象・方法)4-8週齢のmdx mouseより取り出した大腿四頭筋を培養したmyoblast rich cultureものを対象とした。pRSV-Dy vectorを用い、遺伝子導入後10日を越えた時点でのdystrophin染色をもって判断した。retrovector pBN1をlipofectionを用いてpackaging cell line Ψ2に導入、recombinant virusを調製した。recombinant virusを感染後、1週間G418を加えたmedium中で培養、G418耐性クローンにdystrophin染色を行った。結果)dystrophin陽性筋芽細胞は、コントロール(遺伝子導入を行ってない)0に対して遺伝子導入を行ったものは1-10/10^5の頻度で筋芽細胞細胞膜がdystrophin陽性であった。これらの陽性細胞は1つの部位に固まって筒状に存在することから1個のdystrophin陽性筋芽細胞が分裂・増殖を行ったものと考えられる。Retrovirusを用いてmini dystrophin geneを導入したG418耐性筋芽細胞の中約70%の細胞がdystrophin陽性であった。

Purpose) last year, dystrophin owe damage tendons ジ フ ト ロ フ ィ ー モ デ ル マ ウ ス (MDX mouse) へ の in vivo に お け る ヒ ト dystrophin の transient 発 now を HVJ を Iiposome method with い て line い report し た. in this year, に, mdx mouse myoblastに against てin vitroでHVJ-Iiposome method を using を たdystrophin を. Youdaoplaceholder0 Becker-type dystrophin mini gene(6.3Kb) を occurrence of をretrovirus vectorに successful <s:1> た で で で report する. Objects · Methods)4-8 weeks 齢 <s:1> mdx mouseよ よ <s:1> take よ out <s:1> た quadrihamstring を culture <s:1> たmyoblast rich culture よ を を objects と た The を of the pRSV-Dy vector is used to determine the た た by を dystrophin staining at the えた time point で after 10 days of を and 伝 subvector introduction and を を って って. retrovector pBN1をlipofectionを is imported with <s:1> てpackaging cell line Ψ2に and modulated with recombinant virusを た. After recombinant virusを infection, for one week, G418を was added to えたmedium for で culture, and g418-tolerant <s:1> ロ and <s:1> にdystrophin staining was performed を for った. Results dystrophin positive muscle は bud cells, コ ン ト ロ ー ル (legacy 伝 son import line を っ て な い) 0 に し seaborne て heritage 伝 son import line を っ た も の は 1-10/10 ^ 5 の frequency で reinforcement bud cell membrane が dystrophin positive で あ っ た. こ れ ら の positive cells は 1 つ の parts に solid ま っ て tubular に exist す る こ と か ら 1 の が dystrophin positive muscle bud cell divides, raised colonization を line っ た も の と exam え ら れ る. Retrovirusを was introduced into approximately 70% of the <s:1> た g418-tolerant spinotropin cells を using the て てmini dystrophin geneを. The が dystrophin-positive であった cells.

项目成果

乾: "Annual Review内分泌,代謝,1994 先天性代謝異常" 中外医学社, 4 (1994)

干：“内分泌学、代谢年度回顾，1994 年先天性代谢缺陷”中外医学社，4 (1994)

Sakai,N et al.: "Purification and characlerzation of...." J.Biochem.116. 615-620 (1994)

Sakai,N 等人：“纯化和表征……”J.Biochem.116。

Hayashi,J.et al.: "Functional and morphdogical abnormalitees...." J.Biol.Chem.269. 19060-19066 (1994)

Hayashi,J.et al.：“功能和形态异常......”J.Biol.Chem.269。

Tukamoto,H.et al.: "One base deletion in the cysteine-rich...." Hum.Mde.Genet.3. 995-996 (1994)

Tukamoto,H.et al.：“富含半胱氨酸的一个碱基缺失......”Hum.Mde.Genet.3。

Sakai,N.et al.: "Krabbe disease; isolation and charaeterization...." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 485-491 (1994)

Sakai，N.等人：“克拉伯病；分离和表征......”Biochem.Biophys.Res.Commun.198。