リピドーシス動物モデルを用いての中枢神経障害の遺伝子治療

使用脂质沉积动物模型治疗中枢神经系统疾病的基因疗法

• 批准号: 06670830
• 负责人: 衛藤 義勝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670830/
• 关键词: 異染性脳白質変性症; アデノウイルス; レトロウイルス; オリゴデンドロサイト; サルファターゼ; 遺伝子治療

異染性脳白質変性症(MLD)はリソゾーム酵素の1つであるArylsulfataseA(ASA)の欠損により、その基質であるSulfatideがおもにミエリンに蓄積し、その結果、著明な脱髄を引き起こす脳変性疾患である。本年度は、本症の遺伝子治療に関して検討を行った。MLDの主な罹患細胞であるオリゴデンドロサイトへの直接の遺伝子導入をめざし正常なASAを発現するアデノウイルスを作成した。組換えアデノウイルス(AdexlSRASA)はMLD患者より培養した培養皮膚線維芽細胞の酵素欠損を正常の2.3倍-5.2倍に矯正した。発現したASAは免疫沈降法、SDS-PAGEによる解析にても多量の蛋白として細胞内に存在しているのが判明した。また細胞分画法にても発現しているASAは正しくリソゾームに存在していた。またアデノウイルスはMLDの主な罹患臓器であるオリゴデンドロサイトに感染した。最近1つの種類のサルファターゼを細胞に多量に発現させると、その他のリソゾーム酵素およびサルファターゼの活性が低下するとの報告があった。我々もASAに関して同様の検討を行った。ASAを多量発現する培養線維芽細胞は以前作成したASAを発現するレトロウイルスをMLD患者細胞に数回感染させることによって得た。結果としていくつかのサルアターゼの活性低下が認められた。ただそれらの酵素活性低下によるムコ多糖の細胞における蓄積が起こらなかった。今後、アデノウイルスに関してはクリア-しなければならない問題の1つは投与ルートの問題である。現在、我々は血液-脳関門をひろげ髄注により脳内にウイルスを到達させる方法を検討中である。次に多量発現の問題であるが確かにある種のサルファターゼは活性が低下するようであるがムコ多糖の代謝を障害するほどではなかった。よって遺伝子治療に関しては問題ないと思われるので骨髄細胞を標的とした遺伝子導入を行う予定である。

Metachromatic Linear Disorder (MLD) is characterized by the presence of arylsulfataseA(ASA) in the matrix, the accumulation of Sulfatide in the matrix, and the occurrence of various diseases. This year, we will discuss the treatment of this disease. MLD's host cells can be produced by direct gene introduction and normal ASA generation. AdexlSRASA corrected the enzyme deficiency of cultured skin line cells from MLD patients by 2.3 - 5.2 times as much as normal. Asa and SDS-PAGE were used to analyze and identify the presence of a large amount of protein in cells. The cell division method was developed and ASA was established. The main sensor of the MLD is not sensitive to the radiation. Recently, a large number of cell types and enzymes have been reported to have decreased activity. I am working with ASA on the same issue. Asa is produced in large quantities in cultured cells. Asa is produced in cultured cells. Asa is produced in cultured cells from MLD patients. As a result, the activity of the enzyme was low. The enzyme activity was low, and the polysaccharide accumulation in the cells began. In the future, the problem of losing money and losing money will not be solved. Now, I'm going to close the door, and I'm going to open the door, and I'm going to open the door. The problem of multiple occurrence is that the activity of the polysaccharide is low. The gene therapy is related to the problem of bone marrow cell targeting and gene introduction.

项目成果

Yamamoto T.,Eto Y.,et al.: "The attenuated elevation of cytoplasmic calucium concentration following---" Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 438-444 (1994)

Yamamoto T.，Eto Y.，等人：“细胞质钙浓度的减弱升高如下——”Biochem.Biophys.Res.Commun.198。

Ida H.,Eto Y.,et al.: "Characteristics of gene mutation among 32 unrelated Japanese Gaucher disease patients : absence---" Hum.Genet.(in press). (1995)

Ida H.、Eto Y. 等人：“32 名无关的日本戈谢病患者的基因突变特征：缺席——”Hum.Genet.（出版中）。

Hasegawa Y.,Eto Y.,et al.: "Single exon mutation in arylsulfatase A gene has two effects : Loss of enzyme activity and aberrant splicing." Hum.Genet.93. 415-420 (1994)

Hasekawa Y.,Eto Y.,et al.：“芳基硫酸酯酶 A 基因中的单外显子突变有两种影响：酶活性丧失和剪接异常。”

Yamamoto T.,Eto Y.,et al.: "Niemann-Pick type C fibroblasts and their transformed cell lines are hypersensitive to HMG-CoA reductase---" J.Inher.Metab.Dis.17. 724-731 (1994)

Yamamoto T.，Eto Y.，et al.：“Niemann-Pick C 型成纤维细胞及其转化细胞系对 HMG-CoA 还原酶过敏---”J.Inher.Metab.Dis.17。

Ida H.,Eto Y.,et al.: "Pathological and biochemical studies of fetal Krabbe's disease." Brain and Dev.16. 480-484 (1994)

Ida H.、Eto Y. 等人：“胎儿克拉伯氏病的病理学和生化研究。”