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骨芽細胞の増殖分化過程における副甲状腺ホルモン関連ペプチドの生理的意義の解明

阐明甲状旁腺激素相关肽在成骨细胞增殖和分化过程中的生理意义

基本信息

批准号：
06671005
负责人：
池田恭治
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671005/
关键词：
骨芽細胞分化副甲状腺ホルモン関連ペプチド

项目摘要

1.ヒトPTHRP cDNAをセンスおよびアンチセンスの方向に組み込んだ発現ベクター(pRc/CMV)を作成した。2.CaPO4法によりヒト骨芽細胞様細胞株であるSaOS-2にtransfectionを行った後、geneticin存在下でstable transfectantを選択した。3.ヒトPTHRPに特異的なimmunoassayを開発し、これを用いて培養液中のPTHRP濃度のスクリーニングを行い、mock transfectantよりも過剰にPTHRPを産生する細胞株およびブロックした種々の細胞株を同定した。4.PTHRPを過剰発現する細胞株、内因性PTHRPを抑制した細胞株で細胞増殖速度を検討したところ、PTHRPの発現による大きな影響は認められなかった。5.内因性PTHRPの発現を最も抑制した細胞株で、骨芽細胞の分化マーカーの一つであるalkaline phosphatase(Al-P)が著明に上昇し、培養後約4-5週間で石灰化と思われる結節を形成することが観察された。以上の成績から、PTHRPが骨芽細胞の分化過程に何らかの役割を果たしていることが示唆される。6.今後は、他の骨芽細胞のマーカーであるコラーゲン産生やosteocalcin産生、さらにエストロゲン受容体、PTH/PTHRP受容体、ビタミンD受容体の発現などを評価する。また、もう一つの骨芽細胞株として知られるMC3T3-E1細胞にもPTHRPセンスおよびアンチセンス発現ベクターを組み込んでおり、この系を用いてさらに骨芽細胞の分化・増殖過程におけるPTHRP遺伝子の役割を明らかにしていく予定である。

1. PTHRP cDNA was created in the direction of gene expression. 2. CaPO4 method can be used to select the stable transfection agent in SaOS-2 cells. 3. PTRP-specific immunoassay was developed, and the concentration of PTRP in culture medium was determined. The cell lines and strains produced by PTRP were also determined. 4. PTHRP inhibition of cell growth rate in cell lines due to PTHRP inhibition. 5. The development of endogenous PTHRP was most inhibited in cell lines and osteoblast differentiation. Alkaline phosphatase(Al-P) was detected to increase in the first stage of differentiation. Calcification and nodule formation were observed about 4-5 weeks after culture. The above results show that PTHRP plays an important role in the differentiation process of bone bud cells. 6. In the future, the production of osteocalcin, the development of PTH/PTHRP receptors, and the development of D receptors will be evaluated. The differentiation and propagation of bone bud cells in MC3T3-E1 cells were studied.