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ヒト肥満者β_3-アドレナリン受容体m-RNAの組織分布解明に関する研究

阐明肥胖人群β_3-肾上腺素受体mRNA组织分布的研究

基本信息

批准号：
06671044
负责人：
吉田俊秀
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラットやマウスでの従来の成績から、β_3-アドレナリン受容体作動薬の主な標的細胞は褐色並びに白色脂肪細胞である事が知られている。そこでまず、ラットとマウスの褐色脂肪組織のβ_3受容体の検出を、ノーザンブロット法で試みた。即ち、β_1、β_2及びβ_3各受容体cDNAのヌクレオチド配列を参考にして、それぞれ約600、300及び310bpのcDNAプローブを作製し、総RNAについて分析した。しかし、β_1以外のシグナルについては極めて弱く100μgRNAでも検出できなかった。そこで次に、総RNAからmRNAのみを分離し10μgを分析したところ、三者とも検出でき、量的にはβ_1>>β_3=β_2であった。次に、ヒトβ_3受容体を検討する為に、京都府立医科大学婦人科教室・第二外科教室・泌尿器科教室の協力のもと、術前に本研究の趣旨に納得して『摘出標本の一部を医学研究の為に提供する事に同意する』旨の同意書にサインしていただいた患者38名(BMI26.4以上の肥満者13名を含む)から、脂肪組織を術中摘出し液体窒素にて凍結保存した。これらより、mRNAを分離してノーザンブロット法を試みたが、全くシグナルが見られなかった。そこで、より感度の高いRT-PCRを試みた。すなわち、RNA1μgを逆転写酵素によりcDNAにした後、β_3受容体cDNAに特異的な二種類のプライマー(cgagatggctccgtggcctcac,cccaagggccaatggccagtcagcg)を用いてPCRを30サイクルかけた。PCR産物をアガロースゲル電気泳動したところ、予想された約310bpの位置に明確なバンドが認められた。このバンドは2名の肥満症例にて弱かったが、他の全てのサンプルで検出され、しかもマウスのサンプルとも同じであった。これらの結果は、ヒト脂肪組織にもβ_3受容体が存在する事を示しており、これに特異的な作動薬の有用性を示唆するものである。尚、定量的RT-PCR解析には適切な内部標準RNAの開発が必要であり今後の課題である。

The main target cells of the receptor activation agent are brown and white adipose cells. The expression of β_3 receptor in brown subcutaneous fat was studied by means of the method of In other words, the cDNA sequences of the receptors β_1, β_2 and β_3 are referenced, the cDNA sequences of about 600, 300 and 310bp are prepared, and the RNA sequences are analyzed. The gene expression of the gene is very weak, and the gene expression is very weak. In addition, the expression of mRNA was analyzed at 10μg. 38 patients received consent for the purpose of extracting a part of the patient's body for medical research before surgery in the Department of Gynecology, Department of Surgery, Department of Urology, Kyoto Prefectural Medical University.(13 of them had BMI 26.4 or above). Subcutaneous fat was extracted during operation and frozen in liquid. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with me. RT-PCR is a highly sensitive and sensitive method. 1μg of RNA was used to reverse engineer the enzyme, cDNA, and β_3 receptor cDNA. Two specific types of cDNA (cgagatggctccggcctcac, cccaaggccaatggccagtcagcg) were identified by PCR. PCR products were identified at approximately 310bp in length by electroporation. This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. These results indicate the existence and usefulness of subcutaneous fat receptor β_3. Quantitative RT-PCR analysis is necessary for the development of appropriate internal standard RNA.