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遺伝性腎性尿崩症患者におけるバゾプレッシン受容体機能異常の解明

遗传性肾性尿崩症患者加压素受体功能障碍的阐明

基本信息

批准号：
06671137
负责人：
安東明夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671137/
关键词：
遺伝子異常ホルモン受容体尿崩症バゾプレッシン cAMP G蛋白

项目摘要

我々は、幼児期より多飲多尿を呈し、同様の症状を示す者が家系内に多数存在する遺伝性腎性尿崩症患者に対してV2受容体遺伝子のDNAシークエンスを行い、V2受容体遺伝子上に一塩基の置換(^<614>A→G;^<205>Tyr→Cys)が生じていることを明らかにした。すなわちバゾプレッシン(AVP)のV2受容体への結合に重要と考えられる細胞外第2,3ループにアミノ酸変異をおこしていた。この変異V2受容体の機能異常を明らかにするために、COS細胞に変異V2受容体を発現させ、その機能異常を検討した。まず正常V2受容体cDNAをクローニングするために、腎癌患者の摘出腎の正常部分よりRNAを抽出し、RT-PCR法を用いてV2受容体cDNAを増幅分離した。患者V2受容体cDNAは正常V2受容体cDNAからsite-directed mutagenesis法を用いて作成した。それぞれのcDNAを発現ベクター(pSVL)に挿入し、さらにCOS細胞に発現させた。このCOS細胞で、^3H標識バゾプレッシン結合能とバゾプレッシン作用時の細胞内cAMP(cAMPi)産生量を検討した。その結果、患者V2受容体ではバゾプレッシン結合能は正常の約1/10に低下していた(患者KD19.8nM,正常KD1.8nM)。正常V2受容体では、cAMPiはバゾプレッシン0.1nMから増加し、1nMでプラトーに達した。一方、患者では、10nM以上の高濃度のバゾプレッシンでのみcAMPiの軽度の増加が認められた。以上の結果から、本例での腎性尿崩症の主な原因は異常V2受容体遺伝子による変異V2受容体のバゾプレッシンへの親和性低下であると考えられた。

The majority of patients with inherited renal diabetes insipidus present in the family with polydipsia and polyuria during infancy, and the majority of patients with inherited renal diabetes insipidus present in the family with polydipsia and polydipsia, and the majority of patients with inherited renal diabetes insipidus present in the family with polydipsia and polydipsia.<614><205>An important factor in the binding of V2 receptors to AVP is the difference between extracellular 2nd and 3rd receptors. The abnormal function of V2 receptor in COS cells was discussed. RNA was extracted from normal kidney of kidney cancer patients, and V2 receptor cDNA was isolated by RT-PCR. The patient V2 receptor cDNA was generated using site-directed mutagenesis instead of the normal V2 receptor cDNA. The cDNA sequence was detected in COS cells. The amount of intracellular cAMP (cAMPi) produced by COS cells was investigated when the binding energy of 3H-labeled cells and 3H-labeled cells were activated. As a result, the binding energy of V2 receptor was about 1/10 lower than that of normal (KD19.8 nM in patients and KD1.8 nM in normal). Normal V2 receptor is not stable, cAMPi is not stable at 0.1 nM, but at 1 nM. In one case, the patient responded to the increase in the concentration of cAMPi at a high concentration of 10 nM or more. The main cause of renal diabetes insipidus in this case is abnormal V2 receptor gene, abnormal V2 receptor gene and low affinity.