角膜実質細胞によるコラーゲン収縮に対する角膜上皮細胞由来の促進因子の解析

角膜上皮细胞源性角膜细胞胶原收缩促进因子分析

• 批准号: 06671783
• 负责人: 三島 弘
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671783/
• 关键词: 角膜上皮細胞; 角膜実質細胞; コラーゲンゲル収縮

角膜実質細胞をコラーゲンゲルに包埋し、10%ウシ胎児血清存在下で培養すると、培養時間に比例してコラーゲンゲル直径の収縮を認めた。さらに、角膜上皮細胞培養上清の添加によって実質細胞によるコラーゲンゲル収縮は促進された。角膜上皮細胞培養上清をアセトン処理すると、アセトン濃度70%で析出される不溶性分画に、実質細胞によるコラーゲンゲル収縮活性に対する促進効果を認めた。次に、得られたアセトン不溶分画をヘパリンセファロースカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーで精製すると、NaCl濃度400mM付近で溶出されるヘパリン親和性分画が実質細胞のコラーゲンゲル収縮を促進させることが認められた。さらに、この分画をc-18カラムを用いた逆相クロマトグラフィーにて分離精製した。この結果、アセトニトリル52%付近で溶出される分画に実質細胞によるコラーゲンゲル収縮を促進する作用が認められた。さらに、この分画に含まれる蛋白質のアミノ酸配列を検討しN末端から13個までのアミノ酸配列を決定した。そのアミノ酸配列とすでに報告されている蛋白質のアミノ酸配列との比較検討を行ったところ、基底膜成分の一つであるヒトおよびウサギのSPARC(Secreted Protein that is Acidic and Rich in Cystein)のアミノ酸配列と高い相同性が認められた。現在、我々の分離精製した角膜実質細胞によるコラーゲンゲル収縮促進因子がSPARCと同一であるかを検討中である。

Corneal stromal cells must be embedded in 10% fetal serum and cultured for a period of time that reduces the diameter of the cells. In addition, the supernatant of corneal epithelial cell culture was added to the culture medium to promote the growth of corneal epithelial cells. Corneal epithelial cell culture supernatant was treated with 70% of the solution, and the insoluble fraction was treated with 70% of the solution. In addition, the concentration of NaCl was 400mM, and the dissolution rate was 400 mM. In addition, the separation of c-18 was carried out in reverse phase. The results showed that the dissolution rate was 52%, and that the dissolution rate was 52%. In this study, the sequence of 13 amino acids in the N-terminal region of the protein was determined. A comparative study of acid alignment of proteins in the basement membrane was conducted. The identity of acid alignment of SPARC(Secured Protein that is Acidic and Rich in Cystein) was identified. Now, we have isolated and refined corneal stromal cells.