骨組織薄切切片を用いた器官培養系の確立

利用骨组织薄片建立器官培养体系

基本信息

批准号：
06671829
负责人：
池田通
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671829/
关键词：
骨軟骨器官培養ラット

项目摘要

生後2週齢のウイスター系ラット大腿骨組織薄切切片を培養した場合、最も安定して維持されるのは軟骨原性細胞であった。この系において軟骨原性細胞は培養中に増殖し続けるが、一般に軟骨細胞を培養プレート上で培養すると線維芽細胞様細胞に脱分化することが多い。しかし、ここで増殖した軟骨原性細胞の形態を光学顕微鏡で観察すると、明らかに軟骨としての形態的特徴を備えていた。また骨髄細胞では、骨髄中の線維芽細胞様細胞が増殖しており、骨髄の間葉系細胞が増殖したものと考えられた。一方骨芽細胞は増殖傾向がほとんど認められず、また、骨吸収系の細胞は維持することが困難であった。以上の結果から、この培養系は軟骨原性細胞の研究に向いていると考えられた。そこで、研究実施計画にも書いたように、この培養系を用いてBMP-2やFGFの軟骨での作用を確かめる予定であった。しかし、これらの軟骨細胞は増殖し続けており、培養中にその位置を変えてしまう。従って、これらの細胞にあらかじめ目印を付けておく必要がある。そこで、細胞に目印を付ける方法を確立することに本年度の研究の主眼を置くことにした。まずはじめに色素dyeIを細胞上に置いてみたが、結果は思わしくなかった。そこで、生体内に注入して光る物質として、ある種のくらげがもつ蛍光性蛋白質であるGreenFluorescenceProteinに注目し、凍結材料よりその遺伝子をクローニングした。この遺伝子を強力な遺伝子プロモーターの下流につなだものを軟骨原性細胞に注入してうまく光るかどうかを、現在検討中である。当初の計画とは異なった方向に進んだが、こちらの実験系を確立させてから当初予定していたような研究を行なったほうがはるかにすぐれた成果が得られると考え、あえてこの方向に進んだ。

当培养2周大鼠2周大的股骨组织薄片时，最稳定的维持是软骨细胞。在该系统中，软骨细胞在培养过程中继续生长，但是通常，当在培养板上培养软骨细胞时，它们通常会推断成成纤维细胞样细胞。但是，当在光学显微镜下观察到这里生长的软骨细胞的形态时，它显然具有软骨的形态特征。此外，在骨髓细胞中，骨髓中的成纤维细胞样细胞增殖，人们认为骨髓间充质细胞已经增殖。另一方面，成骨细胞几乎没有增殖的趋势，并且很难维持骨吸收细胞。基于上述结果，人们认为该培养系统适用于对软骨细胞的研究。因此，正如研究实施计划中提到的那样，我们计划使用该培养系统来确认BMP-2和FGF对软骨的影响。但是，这些软骨细胞继续扩散并改变其在文化期间的地位。因此，这些细胞需要提前标记。因此，我们决定将今年的研究重点放在建立标记细胞的方法上。首先，我尝试将染料染料放在细胞上，但结果不是很好。因此，我们专注于在某些水母中发现的一种荧光蛋白，一种在某些水母中发现的荧光蛋白，作为一种注射到体内并发光的物质，并从冷冻材料中克隆了基因。我们目前正在调查该基因是否通过将其在强大基因启动子的下游连接到软骨细胞中成功点亮。该计划的方向与原始计划不同，但是我认为在建立这个实验系统后最初计划的研究要好得多，所以我决定朝这个方向前进。