活性化破骨細胞が産生する骨代謝調節因子の探索

寻找活化破骨细胞产生的骨代谢调节剂

基本信息

批准号：
18659541
负责人：
池田通
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

骨組織の腫瘍において反応性骨増生がよく認められるが、本研究はその分子機構について明らかにすることを目的とする。今年度も骨軟部腫瘍の症例を通して幅広く反応性骨増生の観察を続けた結果、巨細胞腫瘍に頻繁に認められる反応性骨増生の場合と同様に破骨細胞の関与が強く示唆された。また、破骨細胞と反応性骨増生部位とは直接接していないことが普通であり、何らかの液性因子が反応性骨増生に係わっていることが考えられた。昨年度までに、吸収性セラミック上の破骨細胞の培養上清には破骨細胞形成を抑制する作用があること、吸収性、非吸収性骨代替材料上で形成された破骨細胞の培養上清には、ともにC2C12細胞の骨芽細胞への分化を促進する作用があることを明らかにしている。今年度は細胞の遺伝子発現解析をするため、本実験用に加圧成形法を用いて直径25mmのハイドロキシアパタイト(非吸収性セラミック)ディスク及びβ-TCP(吸収性セラミック)ディスクを作成した。これらのディスクの気孔率、表面形状及び成分を解析し、いずれも問題がないことを確認した上で、まずこのディスク上で従来からの打ち抜き法で作成したディスク同様、支障なく破骨細胞が形成され得ることを酒石酸抵抗性酸性ボスファターゼ染色及びDAPI染色で確認した。次に、RANKLタンパク存在下でそれぞれのディスク上にマウス大腿骨及び脛骨由来マクロファージを破骨細胞に分化させ、これらの破骨細胞からtotalRNAを抽出し、吸収性セラミック上の破骨細胞と、非吸収性セラミック上の破骨細胞が発現する遺伝子の差を、マイクロアレイを用いて網羅的に解析した。アレイ解析は、それぞれ2回行った実験試料を用いて行った。現在、吸収性セラミック上の破骨細胞と非吸収性セラミック上の破骨細胞の発現遺伝子を比較し、両者間で有意な差があると判断される遺伝子を検索している最中である。この結果に基づき、次の新たな研究プロジェクトを開始する予定である。

在骨组织的肿瘤中通常观察到反应性骨生长，但该研究旨在阐明其分子机制。今年，我们继续通过骨软肿瘤的病例观察到广泛的反应性骨生长，因此，强烈建议实现了破骨细胞的参与，类似于反应性骨生长的情况，这种情况在巨细胞肿瘤中经常看到。此外，破骨细胞不直接与反应性骨生长位点接触是很常见的，人们认为某些体液因子参与了反应性骨骼生长。截至去年，据透露，在可吸收陶瓷上破骨细胞的培养上清液具有抑制破骨细胞的形成的作用，并且在可吸收和不可吸收的骨替换材料上形成的破骨细胞的培养上清液都具有促进C2C12细胞分化为C2C12 C2C12细胞的作用。今年，为了分析细胞的基因表达，我们使用加压成型方法为该实验创建了直径25 mm直径的羟基磷灰石（不可吸收的陶瓷）和β-TCP（可吸收陶瓷）磁盘。分析了这些椎间盘的孔隙度，表面形状和成分，并且在确认它们都不是问题之后，首先通过耐锈蚀性的酸性酸性bossphatase染色和DAPI染色来证实，可以形成破骨细胞，就像没有任何问题一样，就像在此椎间盘上通过常规的打孔方法产生的圆盘一样。接下来，在存在RANKL蛋白的情况下，将源自小鼠股和胫骨衍生的巨噬细胞分化为每个盘上的破骨细胞，并从这些破骨细胞中提取总RNA，并在可吸收的陶瓷和非可再生ceramic ceramic ceramic areans Analys Analys Analys Analys Analizens arements Analys Analys sans Analizens arements Analys Analys Analys sancorentiments Analys Analys arementiments Analys arements Analys rane sancorentiments Analys Analys arementiments Analys arements arementiments分析。使用每个执行两次的实验样品进行阵列分析。目前，我们正在比较在不可吸收的陶瓷上可吸收陶瓷和破骨细胞上的破骨细胞的表达基因，并在两者之间搜索确定在两者之间的差异显着差异的基因。基于这些结果，将启动下一个新的研究项目。