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環境応答機構における大腸菌湾曲DNA結合タンパク質の機能解析

大肠杆菌弯曲DNA结合蛋白在环境响应机制中的功能分析

基本信息

批准号：
06680665
负责人：
上口智治
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

I. 湾曲DNA結合タンパク質H-NSの機能解析1)H-NSによって負の転写制御を受けるproUオペロンの脱抑制を指標にして、hns遺伝子に起きた20種類のミスセンス変異と5種類のナンセンス変異を分離した。hns変異の示す多面的な表現型をもとにして、これらの変異が4つのクラスに分類できることを明らかにした。ミスセンス変異はhns遺伝子上で大きく3つの領域(N末端領域、C末端側2つの領域)にかたまって分離され、それぞれ表現系の示すクラスと相関が認められる。生化学的解析から、H-NSのDNAとの結合にはC末端側が関与していることが示唆された。共同研究(東京薬科大学;神藤助教授、)によって明らかにされたH-NSのC末端側の高次構造と照らしあわせることで、H-NSのDNAとの結合にはC末端側のループ構造が重要な役割を果すことが示唆された。2)栄養飢餓ストレス応答の正の調節因子であるo^Sの発現をH-NSが負に制御するという新しい現象を明らかにした。これは転写段階ではなく、翻訳と翻訳産物の安定性制御の各段階をH-NSが負に制御することで行われている。II DnaJアナログであるCbpAの機能解析1)cbpA欠失変異株を構築し、その表現型を調べた。cbpAの単独欠失変異は野生株とほとんど変らない生育を見せるが、cbpA/dnaJ二重変異株は生育温度領域が著しく狭い、セプタム形成の異常に伴う細胞の伸長、炭素源枯渇に伴う生存率の低下等の表現型が観察された。従ってCbpAはDnaJと同様の生理的機能を保持していると考えられる。2)CbpAの発現がo^S依存的に栄養飢餓ストレスに応答することを見いだした。このことから大腸菌は2種類のDnaJ様シャペロンをストレスの種類に応じて使い分けているのではないかと推測した。

I. Functional analysis of H-NS in H-DNA binding system 1)H-NS in H-DNA binding system 2)H-NS in H-DNA binding system 3)H-NS in H-DNA binding system 4) hns in H-DNA binding system 5) hns in H-DNA binding system 4) hns in H-DNA binding system 5) hns in H-DNA binding system 6) hns in H-DNA binding system 7) hns in H-DNA binding system 8) hns in H-DNA binding system 9) hns in H-DNA binding system 9) hns binding system 9) hns in H-DNA binding system 10) hns binding system 9) hns in H-DNA binding system 1) hns binding system 9) hns binding system 9) hns in H-DNA binding system 10) hns binding system 10) hns binding system 9) H Hns diversity shows multi-faceted phenotypes, which are different from each other. The three domains (N-terminal domain, C-terminal domain) on the different hns gene are separated from each other, and the expression system is related to each other. Biochemical analysis, H-NS and DNA binding are related to the C-terminal side. Joint research (Tokyo University of Science and Technology; Professor Kanto Suke,) showed that the higher-order structure on the C-terminal side of H-NS is important for the combination of DNA and C-terminal structure. 2) The occurrence of positive regulation factors in the growth of hunger and thirst is controlled by negative regulation factors. The stability control of each stage of the reverse phase is controlled by H-NS and negative control. II. Functional analysis of cbpA 1) Construction of cbpA deficient mutants and modulation of cbpA phenotype. The phenotype of cbpA/dnaJ double variant plants was observed in the field of growth temperature, cell elongation, carbon source depletion and low survival rate. CbpA is the same physiological function. 2) The development of CbpA is dependent on the development of CbpA and the development of CbpA is dependent on the development of CbpA. This is the first time I've ever seen a person who's been infected with a virus.