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ニューロン死における成長抑制因子の役割

生长抑制因子在神经元死亡中的作用

基本信息

批准号：
06833015
负责人：
内田洋子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06833015/
关键词：
成長抑制因子(GIF)変性疾患ニューロン死

项目摘要

アルツハイマー病などの変性疾患で、ニューロン死と共に成長抑制因子(GIF)が消失する。GIFには、神経栄養因子活性を抑制する作用だけでなく、フリーラジカル消去能もあることがわかっている。そこで、GIFの消失が、フリーラジカルを介して、ニューロン死を加速するかどうかを明かにするため、以下の研究計画を実施した。1.GIFが酸素ストレスからニューロンを保護するかどうかを調べた。培地に添加したGIFは50%酸素負荷によるニューロン死から培養ラット大脳皮質ニューロンを保護した。2.GIFはprotease類に抵抗性があるため、培養アストロサイト(ラット)にGIFのantisense oligonucleotideを導入してGIF mRNA発現を抑えても、培養アストロサイト内に存在するGIFがすぐに消失する保証はない。そこで、GIFの消失を証明するために、sandwich ELISAを開発した。ヒトGIFを抗原に、ラットGIFも認識する単クローン抗体を作製し、第一抗体とした。次に、ラットGIFのN末端の8-12残基に相当する合成ペプチド3種類、C末端の9-11残基に相当する合成ペプチド2種類に対する抗体を作製したが、C末端11残基ペプチドに対する抗体のみがsandwich ELISAの第二抗体として使用できた。この二種類のGIF抗体を用いて、sandwich ELISAを確立した。3.現在、培養アストロサイトにGIFのantisense oligonucleotideを導入し、GIF mRNA発現を抑えて、GIF蛋白を消失させる条件を検討しており、今後、GIF発現を抑えたアストロサイトと胎生大脳皮質ニューロンとをcocultureし、50%酸素負荷によるニューロン死が加速されるかどうか調べる予定である。

The growth inhibition factor (GIF) is lost due to various diseases. GIF inhibits the activity of neurotrophic factors and eliminates them. The following research projects were carried out: 1. GIF is the key to protecting the environment. Add 50% GIF to culture medium to protect medium. 2. GIF is resistant to protease-like proteins, and GIF antisense oligonucleotide is introduced into the culture medium to inhibit the expression of GIF mRNA. The discovery of sandwich ELISA GIF is the first antibody to be produced in the world. Second, the synthesis of GIF corresponding to residues 8-12 at the N-terminus and residues 9-11 at the C-terminus of GIF was used to produce antibodies corresponding to residues 2 and 11 at the C-terminus. These two types of GIF antibodies were established using sandwich ELISA. 3. Now, GIF antisense oligonucleotide is introduced, GIF mRNA expression is suppressed, GIF protein is disappeared. In the future, GIF expression is suppressed, and the fetal large cortex is cultured. The acid load is 50%.