亜硝酸還元酵素活性の転写後調節機構の解析

亚硝酸还原酶活性转录后调控机制分析

• 批准号: 07640857
• 负责人: 小俣 達男
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07640857/
• 关键词: 亜硝酸還元酵素; 硝酸同化; 活性制御; コファクター; アッセンブリー

1.ラン藻Synechococcus PCC7942の亜硝酸還元酵素(以下NiRと略)の最大活性の発現に必要な遺伝子nirBについて以下の諸点を明らかにした。(1)NiRB欠損株(以下NiRB~株)のNiR活性は野生株の30%程度だったが、NiRの構造遺伝子であるnirAのmRNAの量は、野生株の2〜3倍だった。プラスミドを用いてnirAをさらに過剰発現すると、NiR活性は野生株のレベルにまで高まった。以上の結果から、nirB~株の欠陥はnirAの転写後の段階にあると結論した。(2)細胞培養液に直接トリクロル酢酸を加え、細胞の全タンパク質を速やかに変性させてWestern解析を行ったところnirB~株のNirAポリペプチドの含量は野生株の1〜1.5倍あったので、nirB~株の欠損はNirAポロペプチドの翻訳より後の段階にあると結論した。(3)細胞培養膜液から遠心によって細胞を回収した後にタンパク質を抽出すると、nirB~株のNirAポリペプチド含量は野生株の3分の1に低下していた。新規の酵素の合成を阻害してNiR活性の時間変化を調べた結果、nirB~株と野生株においてNiRホロ酵素の安定性に差異がなかったので、nirB遺伝子の産物は、NirAポリペプチド(NiRアポ酵素)の分解を抑制するか、あるいは、NirAポリペプチドとコファクターの結合を促進するかのいずれかによってNiRホロ酵素の形成を促進するものと推定した。2.ラン藻をCO_2欠乏条件下におくとNiR活性が特異的に低下する。この過程で細胞のNirB含量が変化しないにもかかわらずNirA含量が低下することから、CO_2欠乏条件下ではNiRホロ酵素の分解活性の誘導によってNiR活性が低下すると結論した。

1. ラ ン algal Synechococcus PCC7942 の 亜 nitrate also yuan enzyme (the NiR と slightly) の maximum active の 発 に now necessary な heritage 伝 son nirB に つ い て の below the point を Ming ら か に し た. (1) NiRB owe damage strain (hereinafter NiRB ~ strains) の NiR active は wild strains の 30% degree だ っ た が, NiR の structure but 伝 で あ る nirA の mRNA の は, wild strains の 2 ~ 3 times だ っ た. Youdaoplaceholder0 プラス ドを was used with をさらに てnirAをさらに to develop すると, and the NiR activity was high in the wild strain of <s:1> レベ にまで にまで にまで にまで. The above <s:1> results ら, nirB~ strain <s:1> is short of 陥 陥 nirA 転, and the conclusion of the subsequent <s:1> stage にあると is た. に (2) cell cultures of direct ト リ ク ロ ル boggy acid を え, cell の full タ ン パ ク mass を や か に - sex さ せ て Western analytical line を っ た と こ ろ nirB ~ strain の NirA ポ リ ペ プ チ ド の content は wild strains の 1 ~ 1.5 times あ っ た の で, の owe nirB ~ strain damage は NirA ポ ロ ペ プ チ ド の turn 訳 よ り after The conclusion of the second-order にあると is た. (3) cell culture liquid membrane か ら telecentric に よ っ て cells を back 収 し た after に タ ン パ ク qualitative を spare す る と, nirB ~ の NirA ポ リ ペ プ チ ド content は wild strains の 3 の 1 low に し て い た. New rules の の enzyme synthesis を resistance against し て NiR active の time variations change を adjustable べ た results, nirB ~ seedlings に と wild お い て NiR ホ の ロ enzyme stability に differences が な か っ た の で, nirB heritage 伝 は の products, NirA ポ リ ペ プ チ ド (NiR ア ポ enzyme) の decomposition を inhibit す る か, あ る い は, NirA ポ リ ペ プ チ ド と コ フ ァ ク タ ー の combining を promote す る か の い ず れ か に よ っ て NiR ホ の ロ enzyme formation を promote す る も の と presumption し た. 2. The におくとNiR activity of ラ <e:1> algae を co ₂ is が specifically に low する under conditions of deficiency. こ の process で cells の が NirB content variations change し な い に も か か わ ら ず NirA content low が す る こ と か ら, under the condition of CO_2 owe lack で は NiR ホ の ロ enzyme decomposition activity induced に の よ っ て NiR active low が す る と conclusion し た.