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血管内皮細胞におけるCa流入機序に関する生化学的薬理学的研究

血管内皮细胞钙离子内流机制的生化及药理研究

基本信息

批准号：
07672364
负责人：
久山哲廣
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

報告者は血管内皮細胞における構成型NO合成酵素の活性化に必要な細胞外Ca流入のメカニズムにチロシン・キナーゼが関与すること(Jpn.J.Pharmacol.67:181-183,1995),並びに同キナーゼが血管平滑筋細胞においてエンドトキシンによる誘導型NO合成酵素の発現に関与するチロシン・キナーゼとは相異なるイソザイムであることを世界で初めて見いだすことができた(投稿中)。血管系における2つのNO産生系がともにチロシン・キナーゼを情報伝達因子として利用していることは,学問的興味のみならず創薬のターゲットを考える上でも極めて興味深く,またこの領域は報告者が最初に見いだした現象でもあるので他の研究者よりも一歩進んだ位置にあると考える。したがって現在は内皮におけるCa流入機序と誘導型NO合成酵素の発現機序を主としてチロシン・キナーゼを含むキナーゼ系の観点から平行して検討を進めている。まず比較的大量にかつ安価に供給が可能な培養平滑筋細胞を用い,Western blot法を用いてエンドトキシン,IL-1によりチロシンりん酸化を受ける2本の蛋白バンドを認めた。そのうち一つはNO合成酵素誘導を抑制しないメバロチン処理により消失したので,直接誘導には関与してないものと考えた。他の一つはMAPキナーゼの一つであるp38と考えられるので現在免疫沈降法を用いてその同定を急いでいる。なお,阻害剤を使用した実験により,NO合成酵素誘導にはチロシンキナーゼとnovel typeのprotein kinase C両者の活性化が共に必要であることを初めて示唆した(投稿準備中)。一方,内皮細胞を用いた実験においては細胞内Ca濃度画像解析システムを用いて,細胞内へのCa流入にチロシンキナーゼが必要であることを確認するとともに,phospholipase A_2も必須な役割を担っていることを示唆した。内皮細胞におけるチロシンりん酸化たんぱく質の同定については検出限界の問題もあり再現性のあるデータは得られていないので,現在検出方法の条件設定を急いでいる。

The reporter reported that it was necessary to activate NO synthesis enzymes in vascular endothelial cells. Extracellular Ca was inflowed into vascular endothelium cells. This is the same as that of the vascular smooth muscle cells. This is the same as that of the vascular smooth muscle cells. The NO synthesis enzymes of the vascular smooth muscle cells are the same as those of the vascular smooth muscle cells. The results show that the enzyme synthesis of vascular smooth muscle cells is different from that of the vascular smooth muscle cells. The vascular system, the NO, the blood vessel, the blood vessel, the There is an increase in the flow of Ca into the endothelium, the flow of NO synthase into the sequence, the main sequence, the temperature, the temperature and the temperature. A large number of amperes are available for the production of smooth muscle cells. The Western blot method is used to treat smooth muscle cells, and the IL-1 method is used to acidify the protein. In the first place, the NO synthesis enzyme guide inhibits the activity of the enzyme. It disappears and directs the test directly. He used the same method to determine the emergency response with the current immunoprecipitation method. He said that he would use MAP to determine the p38 test. In order to prevent the use of NO synthesis enzyme, it is necessary to use the activity of novel type synthesis enzyme (in preparation for submission). On one side, the endothelial cells were analyzed by using the intracellular Ca profile, and the intracellular Ca was inflowed into the cells. It was necessary to make sure that the cells were affected, and the phospholipase a2 cells must be excised to show that they were infected. The endothelial cells do not need to be treated in the same way as in the same way. In this way, the method condition is set to set the emergency limit.