Development of Treatment for Salivary Gland Dysfunction Using Cell Extract Derived From Dedifferentiated Fat Cells

使用去分化脂肪细胞提取物治疗唾液腺功能障碍的方法开发

• 批准号: 18H06305
• 负责人: 岸本 直隆
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-08-24 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06305/
• 关键词: 脱分化脂肪細胞; 脂肪組織由来幹細胞; 細胞抽出物; cell extract; シュワン細胞; 末梢神経再生; 唾液腺再生

マウス脂肪組織を採取し、コラゲナーゼ処理後、遠心分離操作を行った。得られた成熟脂肪細胞から天井培養法にて脱分化脂肪細胞（Dedifferentiated Fat Cells: DFATs）、およびストローマ分画から脂肪組織由来幹細胞（Adipose-derived Stem Cells: ADSCs）を樹立した。ADSCs、DFATsを生食中に懸濁し、凍結・溶解を繰り返した後、遠心分離を行い、得られた上清をADSCs由来CE（CE-ADSCs）またはDFATs由来CE（CE-DFATs）として凍結保存した。Mouse Angiogenesis Array Kitを用いてCEに含まれる血管新生関連因子の発現を解析した。またCE中のVEGF、bFGFの発現量をELISA Kitを用いて測定した。次にラットシュワン細胞株を購入し、タンパク濃度を調整した種々の培地で5日間培養した。培養開始から0、2、5日目、MTT assayを行いシュワン細胞数を測定した。CE-ADSCs、CE-DFATsはともにCoagulation Factor III、FGF-2、HGF、Osteopontin、SDF-1、VEGFなど様々な血管新生関連タンパクを発現していたが、CE-ADSCs中のVEGF、bFGF発現量はCE-DFATsと比較して有意に高かった。CE-ADSCsのタンパク濃度を12.5 ug/mLに調整した培地を用いることで、CE無添加の培地と比較して、5日目にシュワン細胞数の有意な増加が認められた。本研究の結果からVEGFを発現しているCE-ADSCsのシュワン細胞増殖効果が示された。従ってCEは末梢神経再生における選択肢の一つとして有用である可能性が示唆された。

收集小鼠脂肪组织，用胶原酶处理，然后离心。使用天花板培养方法从成熟的脂肪细胞和脂肪衍生的干细胞（ADSC）从基质级分从成熟的脂肪细胞中建立了去分化的脂肪细胞（DFAT）。将ADSC和DFAT悬挂在生食中，在反复的冷冻和裂解后，将上清液离心，并将所得的上清液储存为冷冻保存为ADSCS衍生的CES（CE-ADSCS）或DFATS衍生的CES（CE-DFATS）。使用小鼠血管生成阵列试剂盒分析了CE中包含的血管生成相关因子的表达。使用ELISA试剂盒测量了CE中VEGF和BFGF的表达水平。接下来，在各种培养基中购买了大鼠schwann细胞系，并在各种培养基中培养了5天的蛋白质浓度。在培养开始后的第0、2和第5天，进行MTT测定法以测量雪旺氏细胞的数量。 CE-ADSC和CE-DFAT都表达了各种与血管生成相关的蛋白，包括凝血因子III，FGF-2，HGF，HGF，骨桥蛋白，SDF-1和VEGF，但CE-ADSC中VEGF和BFGF表达水平显着高于CE-DFAT的CE-DFAT。使用具有调整为12.5 ug/mL的蛋白质浓度的CE-ADSC浓度的培养基，与没有CE的培养基相比，在第5天，Schwann细胞计数显着增加。这项研究的结果表明，表达VEGF的CE-ADSC的Schwann细胞增殖效应。因此，已经提出，CE可以作为周围神经再生的一种选择。

项目成果

末梢神経再生における脂肪組織由来幹細胞、脱分化脂肪細胞由来cell extractの有用性の検討

检查脂肪组织来源的干细胞和去分化脂肪细胞来源的细胞提取物在周围神经再生中的有用性

• 发表时间: 2019
• 作者: 岸本直隆;山﨑 学;田沼順一;瀬尾憲司
• 通讯作者: 瀬尾憲司

The possibility of dedifferentiated fat cells for tissue engineering

去分化脂肪细胞用于组织工程的可能性

• 发表时间: 2015
• 作者: Pezzotti G;Bock RM;McEntire BJ;Jones E;Boffelli M;Zhu W;Baggio G;Boschetto F;Puppulin L;Adachi T;Yamamoto T;Kanamura N;Marunaka Y;Bal BS;岸本直隆
• 通讯作者: 岸本直隆