新しい顔面神経麻痺治療への脱分化脂肪細胞由来cell extractの応用

去分化脂肪细胞提取物在新型面神经麻痹治疗中的应用

• 批准号: 19K10261
• 负责人: 岸本 直隆
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-11-15 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19K10261/
• 关键词: 脱分化脂肪細胞; 顔面神経麻痺; 再生医療; 細胞抽出物; 脂肪組織由来幹細胞; 末梢神経再生; cell extract; 末梢神経障害

マウス鼠径部から脂肪組織を採取し，コラゲナーゼ処理および遠心分離操作を行うことで，成熟脂肪細胞およびStromal vascular fraction（SVF）を分離した．SVFをフラスコに播種することで脂肪組織由来幹細胞（ADSCs）を、成熟脂肪細胞の浮力を利用した天井培養法により脱分化脂肪細胞（DFATs）をそれぞれ樹立した．ADSCs，DFATsを生理食塩水に懸濁し，凍結・溶解操作，遠心分離操作を加えることで，ADSCs由来の細胞抽出物（CE-ADSCs），DFATs由来の細胞抽出物（CE-DFATs）を作製した．Mouse Angiogenesis Array Kitを用いて解析したところ，CE-ADSCs，CE-DFATsともにCoagulation Factor III, FGF-2, HGF, Osteopontin, SDF-1, VEGFなど多数の血管新生関連タンパクを発現していた。CE-ADSCsを添加した培地を用いてラットSchwann細胞および脊髄後根神経節（DRG）ニューロンを培養することで，CE-ADSCsの添加がSchwann細胞を増殖させ，DRGニューロンの神経突起伸長を促進することが明らかとなった．次に全身麻酔下でラットの下歯槽神経を切断し，同部に生体吸収性ハイドロゲルを足場としてCE-ADSCsを移植後に，神経再性能を神経マーカーであるProtein Gene Products 9.5を用いた免疫組織染色で評価した．コントロール群（生食移植）では切断側近位断端から放射状に乱雑な神経線維が伸長したのに対し，CE-ADSCs移植群では、神経線維が近位断端から遠位方向へ乱れなく伸長した様子が確認された．以上のことからCE-ADSCsおよびCE-DFATsの移植は神経再生治療における有用な選択肢となる可能性が示唆された．

Subcutaneous adipose tissue was collected from mice, and mature adipocytes and Stromal vascular fraction (SVF) were isolated and seeded. ADSCs and DFATs were established by using the buoyancy of mature adipocytes in the patio culture method. Freezing and lysis, telecentric isolation, preparation of CE-ADSCs and CE-DFATs.Mouse Angiogenesis Array Kit was used to analyze CE-ADSCs, CE-DFATs and Coagulation Factor III, FGF-2, HGF, Osteopontin, SDF-1, VEGF and most angiogenesis related factors. CE-ADSCs were added to the culture medium to promote Schwann cell proliferation and DRG neurite elongation. In addition, under general anesthesia, the lower dental groove was cut off, and the same part of the body was absorbed by CE-ADSCs. After transplantation, the nerve regeneration performance was evaluated by Protein Gene Products 9.5. CE-ADSCs transplantation group was confirmed to have a radial pattern and a radial pattern. The radial pattern and the radial pattern of the CE-ADSCs transplantation group were confirmed to have a radial pattern and a distal pattern. The above results indicate the possibility of CE-ADSCs and CE-DFATs transplantation for neuroregenerative therapy.