新しい顔面神経麻痺治療への脱分化脂肪細胞由来cell extractの応用

去分化脂肪细胞提取物在新型面神经麻痹治疗中的应用

• 批准号: 19K10261
• 负责人: 岸本 直隆
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-11-15 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19K10261/
• 关键词: 脱分化脂肪細胞; 顔面神経麻痺; 再生医療; 細胞抽出物; 脂肪組織由来幹細胞; 末梢神経再生; cell extract; 末梢神経障害

マウス鼠径部から脂肪組織を採取し，コラゲナーゼ処理および遠心分離操作を行うことで，成熟脂肪細胞およびStromal vascular fraction（SVF）を分離した．SVFをフラスコに播種することで脂肪組織由来幹細胞（ADSCs）を、成熟脂肪細胞の浮力を利用した天井培養法により脱分化脂肪細胞（DFATs）をそれぞれ樹立した．ADSCs，DFATsを生理食塩水に懸濁し，凍結・溶解操作，遠心分離操作を加えることで，ADSCs由来の細胞抽出物（CE-ADSCs），DFATs由来の細胞抽出物（CE-DFATs）を作製した．Mouse Angiogenesis Array Kitを用いて解析したところ，CE-ADSCs，CE-DFATsともにCoagulation Factor III, FGF-2, HGF, Osteopontin, SDF-1, VEGFなど多数の血管新生関連タンパクを発現していた。CE-ADSCsを添加した培地を用いてラットSchwann細胞および脊髄後根神経節（DRG）ニューロンを培養することで，CE-ADSCsの添加がSchwann細胞を増殖させ，DRGニューロンの神経突起伸長を促進することが明らかとなった．次に全身麻酔下でラットの下歯槽神経を切断し，同部に生体吸収性ハイドロゲルを足場としてCE-ADSCsを移植後に，神経再性能を神経マーカーであるProtein Gene Products 9.5を用いた免疫組織染色で評価した．コントロール群（生食移植）では切断側近位断端から放射状に乱雑な神経線維が伸長したのに対し，CE-ADSCs移植群では、神経線維が近位断端から遠位方向へ乱れなく伸長した様子が確認された．以上のことからCE-ADSCsおよびCE-DFATsの移植は神経再生治療における有用な選択肢となる可能性が示唆された．

从小鼠腹股沟中收集脂肪组织，并通过胶原酶处理和离心分离成熟的脂肪细胞和基质血管馏分（SVF）。通过在烧瓶中播种SVF，建立了脂肪组织衍生的干细胞（ADSC），并利用成熟脂肪细胞的浮力来建立通过天花板培养方法去分化的脂肪细胞（DFAT）。将ADSC和DFAT悬浮在盐水中，并进行冻结和离心，以产生源自ADSC（CE-ADSC）（CE-ADSC）的细胞提取物，并衍生自DFAT（CE-DFATS）的细胞提取物。当使用小鼠血管生成阵列试剂盒进行分析时，CE-ADSCS和CE-DFAT都表达了许多与血管生成相关的蛋白质，包括凝结因子III，FGF-2，HGF，HGF，骨ph，骨pon，SDF-1和VEGF。通过使用补充CE-ADSCS的培养基培养大鼠Schwann细胞和背脊髓根神经节（DRG）神经元，可以发现添加CE-ADSCS会增殖Schwann细胞并促进DRG神经元的神经突生物生长。接下来，在全身麻醉下切割大鼠的下牙肺化神经，并在将CE-ADSC植入以生物吸附水凝胶为支架后植入CE-ADSC，通过使用神经标记蛋白基因产物9.5进行免疫组织化学染色来评估神经重新性能。在对照组（原始移植）中，神经纤维从切割侧的近端树桩径向延伸，而在CE-ADSCS植入组中，确认神经纤维在远端远端延伸。这些结果表明，CE-ADSC和CE-DFAT植入可能是神经再生治疗的有用选择。