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尿路結石予防を目的としたオステンポンチン機能的アミノ酸配列の役割解明

阐明奥斯坦桥蛋白功能氨基酸序列预防尿路结石的作用

基本信息

批准号：
21890220
负责人：
濱本周造
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

OPNはトロンビンで切断されることによって、SVVYGLR配列(マウスではSLAYGLR配列)が、C末端に表れることによって、a9β_1integrinとの結合能など、炎症細胞の遊走に機能すると考えられる。今回同部位に対する抗体を作製し、結石形成への影響を検討した。抗体は、北海道大学遺伝子制御研究所との共同研究により、合成ペプチド(VDVPNGRGDSLAYGLRS)をマウスに免疫して、脾臓からB細胞を採取したのち、ハイブリドーマ形成させ、モノクロナール抗体を作製した。In vitroにおいて、NRK細胞にCOM結晶を蒔いたのち、抗体を投与しCrystal cell interactionを検討したところ、抗体投与により、COM結晶の細胞への接着が低下した。In vivoにおいては、8週齢C57BL/6マウスに対して、100mg/kgのグリオキシル酸を連日腹腔内投与し、投与-1、 2、 5, 8日目に作成した抗SLAYGLR抗体を腹腔内に投与(250μg、 500μg、 1000μg)した。抗体投与群では、抗体濃度依存性に結晶形成量が減少した。また走査型電子顕微鏡により結晶形態を観察したところ、正常群の結晶は放射線状に成長する密度の高いものとなるものの、抗体投与群においては、結晶がばらばらと細かくなる傾向を認めた。OPN抗体は、細胞と結晶との接着を低下させることで、結晶形成を抑制に働くことが示唆された。同部位の抗体を臨床に応用することで、尿路結石予防における分子標的治療に繋がる可能性がある。

The binding energy of OPN, SVVYGLR alignment, C-terminal alignment, a9β_1 integrin and inflammatory cell migration function were studied. To investigate the effect of antibodies on stone formation in the same site The antibody was synthesized by the Institute of Genetic Engineering, Hokkaido University. In vitro, NRK cells, COM crystals, antibodies, and Crystal cell interaction are discussed. In vivo, C57BL/6 was administered intraperitoneally at doses of 100mg/kg on days 1, 2, 5, and 8, respectively. Anti-SLAYGLR antibodies were prepared and administered intraperitoneally at doses of 250μg, 500μg, and 1000μg. The amount of crystal formation decreased depending on antibody concentration. The crystal morphology of the electron microscope was observed, and the crystal density of the normal group was determined. OPN antibody is the first to inhibit the formation of crystals in cells. Antibodies from the same site may be used clinically to prevent urinary tract stones from being treated with molecular targets.