レポーター遺伝子導入マウスを用いた間葉系幹細胞の由来の違いによる歯胚再生能力解明

使用报告基因转染小鼠阐明牙胚再生能力取决于间充质干细胞的起源

• 批准号: 21K21055
• 负责人: 大堀 悠美
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K21055/
• 关键词: 歯胚再生; 間葉系幹細胞（MSC）; 神経堤; 器官原基法; 骨髄間葉系幹細胞; 三次元培養

歯の欠損に対する従来の人工材料を用いた補綴治療に対し，天然歯と同等の構造・機能回復が可能な歯胚再生療法が新たな治療法として期待されている．胎生期に歯胚を形成する歯原性細胞は出生とともに失われるため，歯原性細胞を用いた歯胚再生の臨床応用は倫理的に困難であった．その解決策として成体由来細胞による歯胚の再生が試みられ，骨髄間葉系幹細胞(BMSC)による歯胚構造の再生が報告されたが，その再生効率が低いことが課題となっている．そこで申請者は歯胚の発生過程に着目し，歯原性間葉と同じ神経堤由来細胞を用いることで歯胚再生効率が向上するとの仮説を立てた．神経堤由来細胞を永続的にトレース可能なP0-cre/CAG-CAT-EGFPマウスを用いてP0陽性神経堤由来BMSC・P0陰性BMSCを分取し，歯胚再生を試みることで，発生由来に基づいたBMSCによる歯胚再生効率を検討する．さらに当研究グループは，BMSCを浮遊振盪培養することで，神経堤様の性質を有するMSC細胞塊を形成することに成功した．そこで分取した神経堤由来BMSCからMSC細胞塊を形成することで，さらなる歯胚再生の効率化を試みる．まずP0-cre/CAG-CAT-EGFPマウスからのP0陽性・陰性BMSCの採取を試みた．当該マウスの大腿骨骨髄より骨髄細胞を採取し，フローサイトメーター(FACS)を用いてP0陽性あるいは陰性細胞を分取した．使用する抗体やFACSの分取条件の検討を行い，細胞の分取に成功した．しかしながら採取できた細胞数が想定よりも少なかったため，今後の実験に適用することは困難であった．そのため，今後は磁気ビーズ標識抗体による分取等，他の方法を使用して実験を進められるか検討する．

The artificial materials used in the treatment of dental defects are expected to be used in the treatment of dental defects due to the structural and functional recovery of natural teeth. Since odontogenic cells are formed during the viviparous period and are lost during birth, the clinical use of odontogenic cells in the regeneration of dental embryos is ethically difficult. The aim of this study is to investigate the regeneration of dental embryos from adult derived cells and bone mesenchymal stem cells (BMSC). The applicant is interested in the development process of the tooth embryo, and the growth rate of the tooth embryo is higher. P0-cre/CAG-EGFP was used to isolate P0-positive BMSC and P0-negative BMSC. In this paper, we study the effect of cell culture on the growth and development of BMSC. In this paper, we try to study the efficiency of embryo regeneration from BMSC to MSC cell mass. P0-cre/CAG-CAT-EGFP When the thigh bone is removed, the cells are separated from each other. During the investigation of FACS isolation conditions using antibodies, the isolation of cells was successful. The number of cells taken is determined by the number of cells taken. In the future, the method of identification of antibodies will be used in the future.