レポーター遺伝子導入マウスを用いた間葉系幹細胞の由来の違いによる歯胚再生能力解明

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歯の欠損に対する従来の人工材料を用いた補綴治療に対し，天然歯と同等の構造・機能回復が可能な歯胚再生療法が新たな治療法として期待されている．胎生期に歯胚を形成する歯原性細胞は出生とともに失われるため，歯原性細胞を用いた歯胚再生の臨床応用は倫理的に困難であった．その解決策として成体由来細胞による歯胚の再生が試みられ，骨髄間葉系幹細胞(BMSC)による歯胚構造の再生が報告されたが，その再生効率が低いことが課題となっている．そこで申請者は歯胚の発生過程に着目し，歯原性間葉と同じ神経堤由来細胞を用いることで歯胚再生効率が向上するとの仮説を立てた．神経堤由来細胞を永続的にトレース可能なP0-cre/CAG-CAT-EGFPマウスを用いてP0陽性神経堤由来BMSC・P0陰性BMSCを分取し，歯胚再生を試みることで，発生由来に基づいたBMSCによる歯胚再生効率を検討する．さらに当研究グループは，BMSCを浮遊振盪培養することで，神経堤様の性質を有するMSC細胞塊を形成することに成功した．そこで分取した神経堤由来BMSCからMSC細胞塊を形成することで，さらなる歯胚再生の効率化を試みる．まずP0-cre/CAG-CAT-EGFPマウスからのP0陽性・陰性BMSCの採取を試みた．当該マウスの大腿骨骨髄より骨髄細胞を採取し，フローサイトメーター(FACS)を用いてP0陽性あるいは陰性細胞を分取した．使用する抗体やFACSの分取条件の検討を行い，細胞の分取に成功した．しかしながら採取できた細胞数が想定よりも少なかったため，今後の実験に適用することは困難であった．そのため，今後は磁気ビーズ標識抗体による分取等，他の方法を使用して実験を進められるか検討する．