膵癌遠隔転移における間葉系幹細胞(MSC)の役割の解明とその臨床的意義の検討

膵星細胞に関する今までの研究を基盤に、膵癌のEMT誘導に伴う新規浸潤メカニズムを明らかにするべく研究を行った。まず、膵癌細胞によるECM成分の細胞内取り込みと分解に関わる新規分子を同定した。コラーゲンでコーティングした蛍光ビーズを用いて、培養細胞によるコラーゲン取り込み能を評価した。予想通り、間葉系細胞である膵星細胞は高いコラーゲン取り込み機能を有していたが、その一方で、膵癌細胞もコラーゲンを細胞内に取り込むことをタイムラプス顕微鏡観察、共焦点顕微鏡観察により明らかにした。この取り込み機能に関わる分子を同定するためコラーゲン内包膵癌細胞の分取を試みたが、ビーズを内包した細胞の電気的選択の限界により分取に成功していない。コラーゲン取り込み受容体と報告のあるα3β1-integrin、Endo180をターゲットにノックダウン実験を行ったところ、Endo180依存性に膵癌細胞株がコラーゲンを取り込むことが明らかとなった。次に、膵癌細胞のEMTと細胞内基質分解機構との関係について解明した。我々はTGF-β1を用いたEMT誘導モデルを確立し、膵癌細胞株2種(SUIT-2、KP-2)におけるEMTマーカーの発現変化を確認した。膵癌細胞株はEMTの誘導によりコラーゲンの取り込み機能が亢進することをフローサイトメトリーによる細胞内コラーゲン定量測定により明らかとなった。コラーゲン取り込みレセプターであるEndo180はEMTにより発現が亢進することもmRNAレベル並びに蛋白レベルで明らかとなった。

膵星細胞に関する今までの研究を基盤に、膵癌のEMT誘導に伴う新規浸潤メカニズムを明らかにするべく研究を行った。まず、膵癌細胞によるECM成分の細胞内取り込みと分解に関わる新規分子を同定した。コラーゲンでコーティングした蛍光ビーズを用いて、培養細胞によるコラーゲン取り込み能を評価した。予想通り、間葉系細胞である膵星細胞は高いコラーゲン取り込み機能を有していたが、その一方で、膵癌細胞もコラーゲンを細胞内に取り込むことをタイムラプス顕微鏡観察、共焦点顕微鏡観察により明らかにした。この取り込み機能に関わる分子を同定するためコラーゲン内包膵癌細胞の分取を試みたが、ビーズを内包した細胞の電気的選択の限界により分取に成功していない。コラーゲン取り込み受容体と報告のあるα3β1-integrin、Endo180をターゲットにノックダウン実験を行ったところ、Endo180依存性に膵癌細胞株がコラーゲンを取り込むことが明らかとなった。次に、膵癌細胞のEMTと細胞内基質分解機構との関係について解明した。我々はTGF-β1を用いたEMT誘導モデルを確立し、膵癌細胞株2種(SUIT-2、KP-2)におけるEMTマーカーの発現変化を確認した。膵癌細胞株はEMTの誘導によりコラーゲンの取り込み機能が亢進することをフローサイトメトリーによる細胞内コラーゲン定量測定により明らかとなった。コラーゲン取り込みレセプターであるEndo180はEMTにより発現が亢進することもmRNAレベル並びに蛋白レベルで明らかとなった。