時間分解赤外分光法を用いた膜蛋白質フォールディング機構の解明
使用时间分辨红外光谱阐明膜蛋白折叠机制
基本信息
- 批准号:22870034
- 负责人:
- 金额:$ 2.01万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
- 财政年份:2010
- 资助国家:日本
- 起止时间:2010 至 2011
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本申請研究は、光開裂・解離性分子をβバレル膜蛋白質OmpAに修飾することで蛋白質構造に大きな摂動を加え、それによって引き起こされた変性状態からのフォールディングを生理的条件に近い温度・pH・塩濃度環境下において追跡することを目的とした。そこで、まずOmpAのβバレル構造ドメインの遺伝子配列をpETベクターに組み込んだプラスミドを作成し、そのプラスミドを形質転換した大腸菌を用いることによって発現を試みた。OmpAのβバレルドメインの発現をSDS-PAGEによって確認した。さらに簡便な精製を目的としてHisタグをC末端側に導入したプラスミドを作成すると同時に、システイン残基を導入した変異体の作製も行った。今後、光解離性分子によるOmpAの修飾を行い、構造を詳細に検討する予定である。一方、フォールディング反応に伴う膜蛋白質の構造変化に関する詳細な情報を得るためには、時間分解赤外差スペクトル分光測定を駆使する予定である。さらには、フォールディングキネティクスの解析には、得られた一連の赤外差スペクトルに対してSVD解析とグローバルフィッティング法を用いて、中間体の構造も含めて検討する必要がある。そこで、αヘリックスから構成される膜蛋白質pHRに関して、その光反応サイクルを実時間観察し、詳細な解析を行うことによって、膜蛋白質構造において起こる変化を追跡することを試みた。その結果、溶媒から隔離されたヘリックスの構造変化が光反応サイクルの後期に起こることがわかった。この予備実験により、よりドラスティックな構造変化であるフォールディング反応を時間分解赤外差スペクトル分光測定によってとらえることができると期待される。
This application studies the protein structure, molecular structure and molecular structure of the β-ray membrane protein OmpA. Ompa's β-cell structure is composed of the following components: pET, pET and pET. The development of OmpA beta protein was confirmed by SDS-PAGE. For the purpose of purification, the C-terminal residues were introduced into the system. In the future, the modification of OmpA in photodissociative molecules will be discussed in detail. The detailed information about the structural transformation of membrane proteins can be obtained by time decomposition and red heterodyne spectroscopy. The analysis of the intermediate structure is necessary for the analysis of the intermediate structure. The membrane protein pHR is related to the structure of the membrane protein, and the optical reflection of the membrane protein pHR is related to the structure of the membrane protein. As a result, the solvent is isolated and the structure is changed. In the implementation of this preparation, the structural changes of the design and design of the design will be reflected in the time-resolved red heterodyne spectrometric measurement.
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
In vitro protein folding dynamics in the microsecond-to-millisecond timescale
微秒至毫秒时间尺度的体外蛋白质折叠动力学
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:N. Nakayama;R. Smith;T. Mandel;S. Kimura;A. Boudaud;C. Kuhlemeier;Tetsunari Kimura
- 通讯作者:Tetsunari Kimura
時間分解FTIR差スペクトル計測によるファラオニスハロロドプシンの陰イオン輸送過程での構造変化解析
使用时间分辨 FTIR 差异光谱测量分析阴离子传输过程中法老盐视紫红质的结构变化
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:木村哲就;神取秀樹;古谷祐詞
- 通讯作者:古谷祐詞
Conformational changes chloride-ion pumping during the pharaonis halorhodopsin photocycle studied by time-resolved FTIR difference spectroscopy
通过时间分辨傅里叶变换红外光谱法研究法老盐视紫红质光循环过程中氯离子泵送的构象变化
- DOI:
- 发表时间:2011
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tetsunari Kimura;Hideki Kandori;Yuji Furutani
- 通讯作者:Yuji Furutani
蛍光エネルギー移動キネティクス測定による蛋白質のフォールディング機構の解明
通过测量荧光能量转移动力学阐明蛋白质折叠机制
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:中山北斗;木村成介;Tetsunari Kimura
- 通讯作者:Tetsunari Kimura
Time-Resolved Small-Angle X-ray Scattering Study of the Folding Dynamics of Barnase
- DOI:10.1016/j.jmb.2010.11.052
- 发表时间:2011-02-04
- 期刊:
- 影响因子:5.6
- 作者:Konuma, Tsuyoshi;Kimura, Tetsunari;Takahashi, Satoshi
- 通讯作者:Takahashi, Satoshi
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