エピソーマル型RNAウイルスベクターの遺伝子発現を制御する技術の開発

附加型RNA病毒载体基因表达控制技术的开发

• 批准号: 22K20507
• 负责人: 神田 雄大
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20507/
• 关键词: ウイルスベクター; アクセサリータンパク質; 遺伝子発現制御; ボルナ病ウイルス; 遺伝子細胞治療

アクセサリータンパク質（X）がボルナ病ウイルスベクター（REVec）の細胞内動態に与える影響の評価を行った。まず、通常のREVecとX遺伝子を欠損させたREVec（ΔX/REVec）をVero細胞に感染させ、IFA法で主要なウイルスタンパク質の細胞内局在を観察したところ、REVec感染細胞ではウイルスタンパク質は細胞内に均一に局在していたのに対し、ΔX/REVec感染細胞ではウイルスタンパク質は核内のみに局在していた。次に、薬剤依存性にXを発現するVero 細胞（Vero-X）を作製し、ΔX/REVecを感染させた。薬剤を添加しなければウイルスタンパク質は核内のみに局在したのに対し、薬剤を添加してXの発現を誘導すると、細胞質でもウイルスタンパク質の局在が観察できた。これらの結果から、XがREVecの核外輸送に関与していることが示唆された。REVecは核内でウイルスRNAの転写複製を行う。そこで、Xはウイルスタンパク質の細胞内局在を制御することで、ウイルスRNAの転写複製にも影響するのではないかと推測し、Xの発現量がウイルスRNAの合成量に与える影響を検討した。ΔX/REVecを感染させたVero-X細胞を様々な濃度の薬剤を添加した状態で継続して培養し、RT-qPCR法でウイルスRNAの発現量を定量した結果、ウイルスRNAの発現量は中程度の薬剤を添加した際に最大化した。しかしながら、通常のREVecでは、ウイルスRNAの発現量が時間と共に増加していったのに対し、ΔX/REVecでは、中程度の薬剤を添加した際においても、ウイルスRNAの発現量は一定の発現量を維持しているだけであった。これらの結果から、REVecのウイルスRNAの転写複製には、緻密に制御されたXの発現が必要であると考えられた。

ア ク セ サ リ ー タ ン パ ク mass (X) が ボ ル ナ disease ウ イ ル ス ベ ク タ ー (REVec) dynamic に の cell and え る の appraisal of 価 を line っ た. ま ず, usually の REVec と X heritage 伝 を son owe loss さ せ た REVec Δ X/REVec を Vero cell に infection さ せ, IFA method で main な ウ イ ル ス タ ン パ ク qualitative の cells inside bureau in を 観 examine し た と こ ろ, REVec infected cells で は ウ イ ル ス タ ン パ ク qualitative は intracellular に uniform に bureau in し て い た の に し polices The <s:1> みに of ΔX/REVec infected cells is located in the で ウ ウ ウ ウ <s:1> スタ スタ スタ スタ スタ スタ スタ パ パ パ た た. Secondary に, drug-dependent にXを occurrence するVero cell (vero-x) を formation に, ΔX/REVecを infection させた. 薬 tonic を add し な け れ ば ウ イ ル ス タ ン パ ク within mass は nuclear の み に bureau in し た の に し, seaborne 薬 tonic を add し て X の 発 now を induced す る と, cytoplasmic で も ウ イ ル ス タ ン パ ク qualitative の bureau in が 観 examine で き た. The results of <s:1> れら <s:1> show that ら, XがREVec に are related to the transfer of nuclear transport outside the nucleus and <s:1> て る る る とが とが とが とが とが とが された are related to された. Reveal c ス in the nucleus でウ ス スRNA <s:1> 転 writes replication を lines う. そ こ で, X は ウ イ ル ス タ ン パ ク quality bureau in を の cell suppression す る こ と で, ウ イ ル ス RNA の planning write copy に も influence す る の で は な い か と speculation し, X の 発 now quantity が ウ イ ル の ス RNA synthesis quantity に and え る influence を beg し 検 た. Δ X/REVec を infection さ せ た Vero cells - X を others 々 な concentration の 薬 tonic を add し た state で 継 続 し て し, RT - qPCR method で ウ イ ル ス RNA の 発 now quantity を quantitative し た results, ウ イ ル ス RNA の 発 quantity は now in degree の 薬 tonic を add し た interstate に maximize し た. し か し な が ら, usually の REVec で は, ウ イ ル ス RNA の 発 now と に raised total quantity が time し て い っ た の に し, seaborne Δ X/REVec で は, medium degree の 薬 tonic を add し た interstate に お い て も, ウ イ ル ス RNA の 発 は must now quantity の 発 now quantity を maintain し て い る だ け で あ っ た. こ れ ら の results か ら, REVec の ウ イ ル ス RNA の planning write copy に は, dense に royal さ れ た X の 発 が now necessary で あ る と exam え ら れ た.

项目成果

Establishment of a reverse genetics system for Borna disease virus 2

博尔纳病病毒2型反向遗传学体系的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: Takehiro Kanda;Pauline Santos;Dirk Hoper;Martin Beer;Dennis Rubbenstroth;Keizo Tomonaga
• 通讯作者: Keizo Tomonaga